病毒性肝炎患者血清中肝纤维化标志物的检测.分析与无创肝纤维化肝硬化早期检测诊断方法

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【摘要】目的成都华西华科研究所研究探讨病毒性肝炎患者血清中肝纤维化标志物的水平及意义。方法酶标法检测基质金属 蛋白酶-l(MMP-l)、基质金属蛋白酶抑制剂-l(TIMP-l)和转化因子-P,(TGF-p,),放免法检测转化因子_a(TGF- cx)、透明质酸(HA)、DI型前胶原(PCM)、IV型胶原(C-1V)和层粘蛋白（LN)。结果病毒性肝炎患者血清中 nMP-l、HA、PCm、C-IV和LN水平与对照组比较明显升髙（/^><0.01);»11^-1、了6[-3₁水平与对照组比较差异无 统计学意义(/»>0.05)。结论病毒性肝炎患者血清中肝纤维化标志物中11\«>-1、11入、?(：111、(：-汉和1^具有较 好的临床价值，MMP-l、TGF-p，价值欠佳。

【关键词】病毒性肝炎；肝纤维化；标志物

目前认为星状细胞(HSC)是肝脏中产生胶原等外基 质的主要细胞，而肝损伤-肝实质炎症-坏死-1^(：激活- 大量细胞外基质(ECM)沉积，是肝纤维化发生机制的中心 环节W。肝纤维化是肝脏中细胞外基质，尤其是胶原的过 量沉积，是许多慢性肝病发展为肝硬化的共同病理过程。

1材料与方法

1.1研究对象

肝病患者血清110例，其中女28例，男82例，年龄 19~80岁，平均(46_±17.58)岁，均为2004年1月至2006年 8月我院消化内科、肝胆外科、感染病科住院病人，均符合 2000年《病毒性肝炎防治方案》的诊断标准。其中急性肝 炎患者30例，慢性肝炎患者40例，肝硬化患者40例，健 康对照组30例为我院卫防保健科健康体检者。全部患者

作者简介:李石好（1969-),女，主治医师，主要从事热带传染病 的医学研究工作。

均以B超、CT检查及肝功能检査进行诊断，肝硬化患者均 存在食道静脉曲张、肝脏变形、缩小等指征。

1.2方法

110例血清标本保存于-20丈，基质金属蛋白酶-1 (MMP-1)、基质金属蛋白酶抑制剂-l(TIMP-l)(美国R&D 公司hTGF-p,(美国BI0S0URCE公司），均采用酶联法 (ELISA)检测;转化因子ot(TGF-a)(北京东亚免疫技术研 究所），透明质酸(HA)、IV型胶原(C-IV)、层粘蛋白（LN) (上海海军医学研究所生物技术中心提供），n[型前胶原 (PCin)(重庆肿瘤研究所提供）,均采用放射免疫法(RIA) 检测。

1.3统计学处理

采用SPSS 10.0软件进行t检验。

2结果

2.1 MMP-1、TIMP-1 的检澜

急性肝炎组、慢性肝炎组、肝硬化组，血清中MMP-1

水平虽有升高，但无论与对照组还是各组之间比较，其差 异均无统计学意义(P> 0.05)。各组肝病患者血清中TIMP- 1水平与对照组比较均有升高，差异有统计学意义（P< 0.05),急性肝炎与慢性肝病组（慢性肝炎、肝硬化）比较， 其差异亦有统计学意义(P<〇.〇5 ),慢性肝病与肝硬化之间 的差异无统计学意义(P>0.05,表1)。

1.  TGF-^TGF-a 的检测

慢性肝炎血清中TGF-p,水平虽有升高，但各组病毒 性肝炎血清中TGF-p,水平无论与对照组比较还是各组之 间相比较，其差异均无统计学意义(P>0.05)。急性肝炎 组、慢性肝炎组、肝硬化组血清中TGF-a水平虽有升高， 但无论与对照组比较还是各组之间相比较，其差异亦均无 统计学意义(P>0.05,表1)。

2.3 HA、C-IV、LN、PCIII 的检测

表1病毒性肝炎患者血清中肝纤维化标志物的检测 Tab.l Detection of the serum markers of liver fibrosis in patients with viral hepatitis    x±s

组别	MMP-1	TIMP-1	TGF-p,	TGF-a	HA	pcm	C IV	LN
急性肝炎	7.8±3.2	22l.2±56.5*	40A±8J	9.9±3.4	131.8±87.2*	111.5±43.8**	103.4±29.2*	158.4±30.5*
慢性肝炎	9.2 土 4.1	287.6士 45‘4*	45.4±11.5	12.7±4.4	349.8± 123.6*	154.4±39.8*	128.5±40.2*	153.4±52.1*
肝硬化	8.1±3.3	280,0士 113.4*	32.9±19.4	11.7±7.2	690.5±282.3*	187.8±58.5*	97.8 土 53.2*	142.3±20.5*
对照组	6.9±2.1	167.4士23.4	41.0±9.2	7.8±2.4	58.8±13.0	76.0±13.4	40.4±7.2	120.8±18.5

与对照组比较*尸<0.01, * *尸<0.05

各组肝病患者血清中HA、C-IV、LN、PCI水平与对照组比 较，差异有统{样意义(_5)，急性肝炎与慢性肝病组(慢性 肝炎、肝硬化)比较，其差异亦f统鮮意义(/><0.05,表1)。

3讨论

肝纤维化为慢性肝病发展为肝硬化的共同病理过程。肝 纤维化诊断的金标准是肝脏活检。但由于其有创伤性、费用昂 贵而难以被病人接受，肝纤维化的无创伤诊断(肝纤维化血清 标志物的检测)是目前倍受关注的研究方法。肝纤维化血清标 志物可分为反映细胞外基质(ECM)成份的HA、PCI、C-IV和 LN,反映ECM改变相关酶的基质蛋白酶抑制剂和反映纤维 化形成的相关细胞因子TGF-p尸。

已有作者以肝活检组织病理学诊断为金标准,发现血 清肝纤维化标志物HA、C-IV、LN、PCin在肝纤维化的诊断 中具有一定的临床价值，一些新的指标如TGF-p^TIMP- 1、MMP-1正受到广泛关注™。

MMP-1是降解肝脏ECM的主要成分，在I、111型胶原 的形成过程中起重要作用。而对MMP-I活性起主要作用 的是TIMP-1，TIMP-1通过对MMP-1活性抑制，抑制了 I 型胶原等ECM的降解，从而导致ECM在肝脏内的过度沉 积。Zhang等W研究发现肝纤维化患者的TIMP-1、MMP-1 的血清水平比正常对照组升高2.52和1.67倍。TGF-a是 作用很强的肝细胞增殖促进因子，在正常人的肝组织内表 达，随着年龄的增加，肝细胞逐趋成熟时，表达程度逐渐下 降至完全不表达。

我们的结果显示，慢性肝病患者血清中TGF-p,水平稍 升高，但各组病毒性肝炎患者血清中水平无论与对照组还是 各组之间的比较其差异均无统计学意义（P> 0.05)。TGF-p, 是肝纤维化形成中的一个重要因子，但血清或血浆TGF-民 水平，由于受产生、活化、降解以及外周血细胞受体结合等各 种因素影响所致,故诊断肝纤维化意义不大。TGF-_a是作用 很强的肝细胞增殖促进因子，亦有研究中提示，肝癌患者血 清中TGF-a的水平明显高于急性肝炎组、慢性肝炎组和肝

硬化组。从而提示在慢性肝炎、肝硬化向高发性肝癌转化 过程中,TGF-ct有可能成为临床指标之一。

HA是ECM的重要成分,HA水平升高是由于星状细 胞合成HA增加，肝血窦内皮细胞损伤导致肝脏对血清中 的HA摄取和降解减少所致。肝硬化晚期肝血窦内皮细胞 功能低下，血清HA更高[^5]。LN是ECM中的前胶原蛋白， 目前越来越多的资料显示血清LN水平可反映肝纤维化程 度，并与门脉高压有密切关系，可作为诊断肝纤维化的指 标^[6)。？(：111为111型胶原前体,在肝脏星状细胞(把〇合成， 并释放到细胞外，已有研究提示在肝纤维化的早期,PCI 合成较活跃但晚期合成减慢，故PCM水平下降，因而PC I作为肝纤维化程度的指标尚不敏感，它只能作为活动性 纤维化指标^[6]。C-1V型胶原是由内皮细胞合成的，是构成 基底膜的主要结构成分，有报道认为它是反映病毒性肝炎 纤维化程度最有价值的指标。

成都华西华科研究所

研发生产无创肝纤维化肝硬化早期检测诊断仪

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