肝纤维化四项联合检测对肝纤维化 早期诊断的临床意义与无创肝纤维化肝硬化早期检测诊断方法

成都华西华科研究所研究肝纤维化是肝硬化的前期改变，同时也是慢性肝病的重 要病理改变，是在慢性肝损伤的发展过程中，由于致病因素 的持续作用和机体免疫功能失调，以至肝细胞持续受损，纤 维组织不断增生而达到肝纤维化阶段。肝纤维化的发展与肝 病的进展及预后有密切关系，由于肝纤维化具有可逆性，如 何将肝硬化在早期逆转，从而阻断肝硬化的形成，对保护肝 脏功能具有重要意义。检测血清肝纤维化4项：透明质酸 (HA)、m型前胶原N端肽(PmNP)、W型胶原（IV-Col)、层粘 连蛋白（LN)的含量，能反映肝病患者病情发展状况，衡量炎 症活动度、纤维化程度，是诊断肝纤维化的敏感指标。本研究 通过197例血清标本检测，探讨肝纤维化4项检测对肝病患 者的临床意义。

1资料与方法

1.1临床资料:2011年4月至6月我院确诊的脂肪肝、慢性 肝炎、肝硬化患者以及肝功能长期异常者共197例，男性141 例，女性56例，年龄35~70岁。其中肝硬化患者16例，脂肪 肝患者59例，慢性肝炎患者68例，肝功能长期异常者54

例。

1.2试剂与仪器：LN试剂盒;P1NP试 剂盒(; W-Col 试剂盒（; HA试剂盒); JETLIA-962化学发光仪，均为公司产品。

1.3检测原理:LN、PmNP、W-Col:基于双抗体夹心法原理 的化学发光免疫分析。纯化的特异性鼠单克隆抗体预先包被 在微孔板表面，加人到待测标本后标本中的相应抗原与微孔 板表面的特异性抗体相结合，同时也会和辣根过氧化物酶标 记的另一株特异性的单克隆抗体相结合，这样在微孔板表面 形成了特异性抗体-抗原-酶标记抗体的免疫复合物，洗涤后 加人发光底物，测定相对发光强度与同时测定的标准曲线相 比较，计算出标本中相应抗原的浓度。

1.4检测方法（1)标本采集:均采集患者空腹全血，经离心 后收集血清:-39~-36 T保存;检测时将复融标本充分平衡至

室温。(2)实验方法:①按试剂盒的操作说明书进行操作。②标 准曲线制作：以2个浓度水平校准品剂量为X轴，对应的校 准品孔相对发光强度为Y轴，进行回归分析，得到回归曲线 方程。③标本浓度计算:LN、P羾NP、W -Col:采用双对数回归 方法来处理数据。利用各校准品孔相对发光强度和对应的各 校准品剂量进行回归分析处理，得到校准品剂量-反应曲线 的回归方程，再根据待测标本的相对发光强度可以从回归曲 线上返算出标本中待测物的浓度。HA:采用Logit-ln回归方 法来处理数据。利用各校准品孔相对发光强度和对应的各校 准品剂量进行回归分析处理， 得到校准品剂量-反应曲线的 回归方程，再根据待测标本的相对发光强度可以从回归曲线 上返算出标本中待测物的浓度。（3)质量控制:通过标准曲线 来进行测定过程的质量控制。标准曲线通过标准：校准品剂 量-相对发光强度响应曲线相关系数>0.990;否则，该批次检 测结果无效。

2结 果

2.1标准曲线回归系数:各次检测的标准曲线回归系数均大 于0.996,检测结果正确有效，见第1176页表1。

2.2肝纤维化4项检测结果:根据试剂盒给定参考值:LN: 0~ 130 滋g/L;P!NP:0~12 滋g/L; W-Col:40~140 滋g/L;HA:0~120 滋g/L，在197份检测的血清中，84例肝纤维化4项检测结果 异常，异常结果见第1176页表2。

判断197例高危人群血清标本的检测结果，其中肝纤维 化4项均正常的113例，84例检测结果存在异常，占43%。在 此84例患者中，肝纤维化4项检测中1项结果异常的患者有 26例、2项结果异常的患者有14例、3项结果异常的患者有 26例、4项结果异常的患者有18例。

在肝纤维化4项检测结果异常中，肝硬化患者检测阳性 率100%(16/16)，脂肪肝患者检测阳性率37%(22/59)，慢性 肝炎患者检测阳性率27%( 18/68)，肝功能长期异常患者检测 阳性率 52%(28/54)。

3讨 论

实用医技杂志 2011 年 11 月第 18 卷第 11 期 Journal of Practical Medical Techniques , November 2011, Vol. 18, No. 11

	表1	标准曲线回归系数
测定项目	测定日期	回归系数	人份
LN/PHNP/W-Col/HA	2011年4月15日	0.999 23/0.999 89/0.999 56/0.997 23	32
LN/PHNP/W-Col/HA	2011年4月.29日	0.998 56/1.000 00/0.999 43/0.996 75	40
LN/PHNP/W-Col/HA	2011年5月15日	0.999 13/0.999 69/0.999 71/0.998 07	20
LN/PHNP/W-Col/HA	2011年5月28日	0.999 72/0.999 65/0.99 976/0.996 58	39
LN/PmNP/W-Col/HA	2011年6月15日	0.999 63/1.000 00/0.998 79/0.997 25	41
LN/PmNP/W-Col/HA	2011年6月30日	1.000 00/0.999 12/0.999 56/0.998 23	25

表2肝纤维化4项检测结果异常情况

项目	肝硬化	慢性肝炎	脂肪肝	其他	合计
1 项异常	!1	8	10	!7	26
2项异常	!1	!6	!2	!5	14
3 项异常	!4	!3	!7	12	26
4项异常	10	!1	!3	4	18
合计	16	18	22	28	84

肝纤维化的发展与肝病的进展及预后有密切关系^[1]。健 康者肝脏内m型前胶原n端肽是m型前胶原分泌到肝细胞 外沉积前经氨基端肽酶裂解产生的氨基多肽，在此过程中 p m np与m型胶原呈等分子浓度，因此，血清p m np水平可 作为检测m型胶原合成情况的指标，m型胶原pm np增高， 与肝纤维化的活动程度密切相关，同时与肝脏炎症坏死也有 关，是反映肝纤维化发生与发展的动态过程；w型胶原主要 分布在血管、胆管的基底膜中，肝窦内无明显沉着，当肝纤维 化发生时，汉型胶原可能是最早增生的纤维，是反映胶原蛋 白的生成而非降解的一项指标，w型胶原与纤维化的程度有 关;LN属于非胶原性结构糖蛋白，主要由内皮细胞和储脂细 胞合成，正常肝脏间质内含少量LN，在肝纤维化和肝硬化时， 肌成纤维细胞增多，大量合成和分泌胶原，LN等间质细胞而 形成完整的基底膜，纤维化后期升高尤为明显;HA是结缔组 织基质的主要成分，由间质细胞合成，属蛋白多糖，肝细胞受 损时，静止期肝星状细胞被激活转化为肌成纤维母细胞，分 泌上调，降解功能下降，导致HA升高，肝纤维化时，HA变化

最大并明显升高，是反映慢性肝病纤维化和炎症性改变最敏 感指标^[2]。

以往认为肝纤维化的发生是不可逆的过程，近年来的证 据表明，肝纤维化是高度动态过程，同时具有进展和逆转潜 能，肝纤维化甚至早期肝硬化是可逆的，而肝纤维化4项的检 测能早期发现肝纤维化^[3]。本文通过对197例高危人群及肝病 患者肝纤维化4项检测发现，84例肝纤维化4项检测中一项 或几项均有不同程度的升高，其中肝硬化患者检测阳性率 100%，与肝纤维化是肝硬化前期病理改变相符，脂肪肝、慢性 肝炎患者的阳性检测率分别为37%、27%，提示患者要改变饮 食习惯，积极治疗，确保肝功能正常，预防肝硬化的发生，而54 例长期肝功能异常患者中，肝纤维化4项检测异常阳性率达 51.9%，提示临床医生应高度重视此类患者的病变转归，积极 寻找引起肝功能异常，肝纤维化的原因，以便及早进行干预， 阻止肝纤维化引起的进一步肝功能损害。因此动态观察肝纤 维化4项各指标的变化是肝纤维化临床诊断的良好指标，对 肝纤维化及肝硬化患者临床诊疗提供可靠的依据。

成都华西华科研究所研发生产无创肝纤维化肝硬化早期检测诊断仪

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