肝硬化患者血清HBV DNA检测的临床意义与无创肝纤维化肝硬化早期检测诊断方法
肝硬化患者血清HBV DNA检测的临床意义与无创肝纤维化肝硬化早期检测诊断方法
我国慢性乙型肝炎（CHB)后肝硬化在肝硬化分类中占居 首位CHB后肝硬化的发生与多种因素相关。2012年亚太 地区CHB治疗共识中明确指出对HBeAg阳性的肝硬化患者 及HBeAg阴性的肝硬化患者无论ALT水平高低只要检出 HBVDNA者均建议抗病毒治疗[2]。由此可见抑制HBV复制 在治疗和延缓肝硬化的形成中具有重大意义，因此本文对肝硬 化患者进行免疫标志物及HBV DNA表达水平的测定旨在阐明HBVDNA复制及HBeAg表达与肝硬化形成之间的关系， 现报道如下：
资料和方法
一、研究对象
所选病例来自陕西职业技术学院门诊部和浙江省立同德 医院2012年5月至2014年9月间的门诊或住院患者602例，
其中502例为乙型肝炎后肝硬化患者，100例为单纯C.HB患 者，所选病例的诊断符合病毒性肝炎防治方案[3]，所选患者均 为HBsAg阳性的慢性乙型肝炎患者，排除甲型、丙型、戊型、丁 型、庚型及酒精型肝炎及其他原因引起肝硬化形成的患者。其 中男性397例，女性205例，平均年龄50. 5岁。
二、 实验方法及仪器
HBV DNA定量检测，采用实时荧光定量PCR技术，试剂 盒由上海之江生物科技股份有限公司提供，试剂盒检测下限设 为500 IU/mL, HBVDNA检测，取血清50 yL加入等体积的 DNA 抽提液 100 "C 煮沸 10 min，12000 r/min 离心 10 min,取 上清液2 pL进行PCR检测，试剂配比及反应条件严格参照试 剂说明书进行。乙型肝炎免疫标志物检测：采用酶联免疫法， 试剂盒为上海科华生物股份有限公司生产试剂盒，具体操作按 照说明书进行。检测仪器AB Step one pluse荧光定量PCR 仪。
三、 统计学分析
应用SPSS13.0软件进行分析，计数资料以百分比表示，进 行Z2检验分析，设定P<〇. 〇5为差异有统计学意义。
结 果
一、 观察组和对照组HBeAg的表达
观察组502例患者中HBeAg阴性患者占82.07%(412/ 502)，HBeAg阳性患者占17. 93%(90/502)，对照组100例患 者HBeAg阴性患者占65% (65/100)，HBeAg阳性患者占 35%(35/100)，两组HBeAg阴性率存在统计学差异（x2 =
1.1 36，P<0. 05)。
二、 HBeAg阳性时观察组和对照组HBV DNA的表达
HBeAg阳性时观察组90例患者血清71例检出HBV
DNA，阳性率78. 89%平均含量为5. 38±3.75 lg IU/mL，对照 组35例患者血清31例检出HBV DNA，阳性率88. 57%平均 含量为5. 75 ± 3. 55 lg IU/mL，两组HBV DNA阳性率及平均 含量无统计学差异P>〇. 05,数据见表1。
表1 HBeAg阳性时观察组和对照组HBV DNA的表达
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例数 |
HBV DNA |
HBV DNA |
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(例） |
阳性（％) |
平均含量lg IU/mL |
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观察组 |
90 |
71(78.89) |
5. 38 ±3. 75 |
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对照组 |
35 |
31(88.57) |
5. 75 ±3. 55 |
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P值 |
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>0.05 |
>0. 05 |
三、HBeAg阴性时观察组和对照组HBV DNA的表达 HBeAg阴性时观察组412例患者血清229例检出HBV DNA,阳性率55•58%平均含量为4•21±3.05lgIU/mL，对照 组65例患者血清17_例检出HBV DNA，阳性率26. 15%平均 含量为4.41 ±2. 15 lg IU/mL,两组HBV DNA阳性率比较存 在统计学差异P<〇. 〇5，HBV DNA平均含量无统计学差异 P>0. 05。数据见表2。
表2 HBeAg阴性时观察组和对照组HBV DNA的表达
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例数(例） |
HBV DNA 阳性（％) |
HBV DNA 平均含量lg IU/mL |
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观察组 |
412 |
229(55.58) |
5. 38 ±3. 75 |
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对照组 |
65 |
17(26.15) |
5. 75 ±3. 55 |
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P值 |
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<0. 05 |
>0. 05 |
讨 论
慢性乙型肝炎（CHB)感染是我国最主要的传染性疾病之 一，肝炎后肝硬化是乙型肝炎感染后的一种结局，我国乙型肝 炎HBsAg携带者已有明显下降，普通人群感染率维持在
2007, 18%M。目前乙型肝炎感染最高的人群为计划免疫前出生人 群，该人群目前年龄多已大于40岁，专家研究表明45岁以上 HBV感染人群肝硬化的发生率最高[«。在肝硬化的发生因素 中病毒性肝炎占主要地位[6]。2014年《中国慢性乙型肝炎防 治指南》[3](科普版）中对慢性乙型肝炎合并肝硬化患者的治疗 做出了规范，对肝硬化患者如发现体内存在病毒复制应尽早采 用抗病毒治疗。因此肝硬化患者判断体内病毒是否复制将显 得尤为重要。
本文对502例肝炎后肝硬化患者进行了乙型肝炎病毒复 制指标，HBV DNA及HBeAg的表达进行了研究，502例患者 中HBeAg阳性者只占17.93%,绝大多数人HBeAg阴性，这 与谢蕾等[7]报道一致，童永喜等对这一现象做出了解释，认为 HBeAg阴性并不表示HBV病毒未复制，要考虑病毒序列是否 发生了前C区的变异，当变异发生时可导致HBeAg不表 达[s]，但此时的病毒仍在复制。这一现象在血清HBVDNA检 测中也得到了验证，502例患者中HBeAg阳性者血清HBV DNA检出率78. 89%，在HBeAg阴性组中HBVDNA检出率 55. 58%,从病毒含量上看HBeAg阳性患者HBV DNA平均 含量高于HBeAg阴性组，这与病毒复制的理论相一致，当 HBeAg阳性时可以确定病毒存在高度复制，在慢型乙型肝炎 感染病情稳定，HBeAg转阴时，可认为病毒停止复制或低水平 复制，但这一现象在HBeAg阴性的肝硬化组中并不适用，实验 结果表明HBeAg阴性时仍有一半以上患者体内存在HBV病 毒，而对照组中当HBeAg阴性时，HBV DNA检出率只有 26. 15%,同时在HBeAg阴性的状态下与对照组相比较病毒复 制存在显著差异。
从观察组与对照组数据分析，观察组中HBeAg阴性率明 显髙于对照组（82. 07% vs 65%)，存在统计学差异，表明 HBeAg阴性患者肝硬化发生率较高。观察组与对照组在 HBeAg阳性时无论是阳性率还是血清HBV DNA病毒平均含 量两者表现相当，无统计学差异，但在HBeAg阴性时观察组 HBV DNA阳性率显著高于对照组（55. 58% vs 26. 15),存在 统计学差异，病毒平均含量无统计学差异，这更进一步表明肝 硬化的发生与体内病毒长期复制相关。国内陆传统™报道 HBeAg阴性慢性乙型肝炎患者血清病毒载量与肝脏炎症程度
成正比，而长期炎症刺激又是肝硬化发生的直接诱因，因此笔 者认为对肝硬化患者应定期检测HBVDNA含量，此时HBV DNA含量比HBeAg的表达更能准确反映病毒复制。
综上结论，慢性乙型肝炎后肝硬化的形成与HBVDNA持 续存在有关，在预防和治疗肝硬化时要时刻关注体内血清 HBV DNA的复制情况，不能简单地以HBeAg的表达来判定 病毒是否复制。
成都华西华科研究所研发生产无创肝纤维化肝硬化早期检测诊断仪
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