miRNA诊断慢性肝病及肝纤维化价值的研究进展与无创肝纤维化肝硬化早期检测诊断方法

肝纤维化是指因各种致病因子作用下，产生以肝星状细 胞活化增殖作为中心环节，细胞外基质大量产生和沉积，从 而逐渐形成纤维组织，进一步继发破坏正常肝组织为主要 特征的病理改变。肝纤维化的过程是可逆的，这是慢性肝病 的共同特征。寻找与肝纤维化相关的基因，了解肝纤维化发 生、发展的分子遗传学机制，进而为肝纤维化的诊断、治疗 提供理论依据，是目前的研究热点。

微小RNA(miRNAs：)是近年发现的，以序列特异性方式 调控基因表达的一种非编码蛋白质的单链小分子RNA，其 长度通常为21~25个核苷酸，主要与靶基因转录的mRNA 3'非编码区通过完全互补或不完全互补方式结合，在转录后 水平调节靶基因的表达。111丨1^入₃于1993年在秀丽隐杆线 虫实验中w被发现，至今为止，人类miRNA家族已被发现有 2 000 多个成熟的 miRNA(miRBase vl9.0; http://www.mirbase. org)，且相关的计算机软件已可预测到60%的人类miRNA 靶基因mRNA^[2]。

miRNA的生成需要通过以下步骤。首先，细胞核内的初 始miRNA被RNasel Drosha裂解，生成miRNA前体，经 Ran-GTP依赖的转运蛋白exportin-5转运到细胞质，在细胞 质中经Dicer酶作用生成双链miRNA,最终解螺旋生成成熟 的miRNA，成熟的miRNA通过诱导沉默复合物（RISC；)及 Argonaute/ EIF2C (AGO)蛋白，与靶基因RNA联系并识别调 节RNAM。多种生命活动受miRNA干扰RNA方式的影响， 如细胞代谢、抗病毒、凋亡；胚胎的分化、发育；肿瘤的发生、 发展及治疗中的耐药。

miRNA在人类疾病方面的调控作用已受到极大关注 近年来多个研究显示，miRNA在肝脏疾病中呈差异性表达， 提示miRNA可能参与调控肝脏疾病的发生、发展或预后转 归WU。目前，大量研究均致力于分析miRNA在慢性肝病及 肝纤维化发生、发展中的作用，本文就miRNA与慢性肝病及 肝纤维化间的关系进行介绍。

miRNA与慢性病毒性肝炎

在我国，慢性乙型肝炎（乙肝）和丙型肝炎（丙肝）是肝纤 维化及肝硬化的重要致病因素，而早期诊断和有效治疗是

通讯作者：陆伦根 E-mail: lungenlul965@163.com

阻止病情进展并降低患者病死率的重要手段。在乙肝病毒 (hepatitis B virus, HBV)感染过程中，miRNA可通过影响病 毒复制、宿主免疫应答、抗原提呈等多种方式参与疾病的发 生、发展。一方面，肝脏内源性miRNA可通过与病毒mRNA 结合，调控HBV基因的表达和复制；另一方面，病毒自身合 成的miRNA与靶mRNA结合介导基因沉默，逃避宿主免疫 系统的识别和杀伤，也可攻击宿主的防御系统，使得病毒长 期处于潜伏状态，在两者相互制约下调控疾病的进展。Zhang 等^研究表明，miR-1可通过调控HBV宿主基因的表达来提 高HBV的复制、转录及抗原的表达和分泌等，在一定程度上 加速了乙肝患者病情的发展。Chen等[¹³]对隐匿性乙肝患者 的循环miRNA表达谱进行了筛选及验证，结果发现与正常 人相比，111丨11-231^₁11讯-122、^-7〇、和111丨1^150表达量有显著 差异，且经受试者工作特征（R0C)曲线分析，证明这4个差 异的miRNA对隐匿性乙肝有很高的诊断效能。Ji等[¹⁴]对包 括正常人、慢性HBV携带者、慢性乙肝患者、乙肝相关肝衰 竭患者的血清miRNA表达谱进行系统性比较分析，发现 miR-122、miR-194、miR-223、miR-16、miR-92a、miR-20a、miR- 106a、let-7b在病例组血清中的表达明显增高，提示这些 miRNA与HBV感染密切相关，可作为潜在的诊断标志物。 随后，国内Zhang等™构建了体外急性及慢性HBV感染模 型和正常模型，分别检测3组的miRNA表达谱，结果显示， 与正常模型相比较，HBV急性感染期中77个miRNA的表 达水平有显著差异，而在HBV慢性感染期中出现差异表达 的miRNA达48个，进一步说明miRNA可提示HBV的感染 状态，将有可能成为诊断标志物及有效的抗病毒治疗靶点。

miRNA在丙肝病毒（hepatitis C virus, HCV)感染中同样 也起了重要作用。Liu等¹¹⁶¹的研究表明，miR-24、miR-149、 tniR-638、miR-1182参与了 HCV的感染、复制和增殖，提示 这些miRNA可作为潜在的诊断丙肝炎的标志物。另一项研 究表明，降低miR-141的表达量可抑制HCV复制及增殖^[1\ MiR-122是在HCV感染中被研究较多的miRNA,其与HCV 基因的作用机制目前虽尚未完全被阐明，但其与HCV多个 非编码基因区域相互作用是病毒RNA多样化的关键，而对 miR-122表达水平进行下调则可抑制HCV的复制及表达》⁸1。 另外，Henke等™提出，miR-122还可通过在翻译起始阶段增 强核糖体与病毒RNA的亲和力，促进HCV翻译。Marquez 等m进一步在正常人及慢性丙肝患者中检测_miR-21和miR-

122表达量，结果发现miR-122与血清丙氨酸转氨酶、天冬 氨酸转氨酶及丙肝肝纤维化分期呈负相关，而miR-21与以 上指标呈正相关，提不miR-122和miR-21表达水平的素乱 与肝纤维化密切相关。另一项研究证实，miR-122与miR- 155可作为HCV炎症介导肝损伤分子标志物，但治疗前的 血清miR-122水平不能对HCV抗病毒治疗是否有持续性病 毒应答反应进行预测

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