miRNA与酒精性及非酒精性脂肪性肝病

酒精性肝病和非酒精性脂肪肝性病是常见的慢性肝脏 疾病之一。慢性酒精中毒可引起肝脏脂肪变性、炎症、纤维 化及硬化等，从而增加了发生肝癌的风险^₎!11丨11\人在酒精性 肝病中的作用是近年研究的热点。近期研究表明，酒精暴露 会改变肝细胞的miRNA表达谱P^Meng等^的研究表明，长 期暴露于酒精或内毒素者，其肝细胞和胆管细胞中的miR- 34a表达量明显增加，同时基质金属蛋白酶-1和基质金属蛋 白酶-2的表达受miR-34a调节，进而进一步调控酒精性肝 纤维化的发生、发展。Jiang等％研究发现，miR-21可通过 PTEN/PI3K信号通路调控酒精性肝病肝纤维化的进程，而 miR-9和miR-335则可通过与靶基因结合来影响酒精性肝 病的进展。

非酒精性脂肪肝在肝组织学特征上可分为单纯性肝脂 肪变性、非酒精性脂肪性肝炎（non-alcoholic steatohepatitis， NASH)和其相关肝硬化。NASH的特征是存在肝脏炎症和肝 细胞损伤，且高达15%~20%的患者可发展为肝纤维化、肝硬 化甚至肝癌^²⁵^。多个研究表明，miRNA表达谱改变可调控 NASH发生机制中的相关基因，影响脂质和葡萄糖的代谢， 调节未折叠蛋白的反应、氧化应激、内质网反应及相关细胞 的增殖、分化及凋亡等I²⁷-%。Cheung等m对40例NASH患者 及40名正常人的肝组织进行miRNA表达谱检测及PCR验 证，结果显示，NASH患者肝组织中差异表达的miRNA达 46个(23个显著上调，23个显著下调）。Cermelli等网对非酒 精性脂肪肝性病患者及正常人的血清miRNA表达谱进行对 比分析，发现病例组中miR-34a和miR-122表达水平明显上 调，同时这2个差异表达的miRNA与患者的丙氨酸转氨酶 及天冬氨酸转氨酶水平、肝纤维化分期、炎症分期呈正相 关，提示miR-34a和miR-122可作为非酒精性脂肪肝性病的 诊断标志物。Estep等剛的研究纳入了 12例NASH患者和 12名正常人，分别检测其内脏脂肪组织样本miRNA表达 谱，结果显示 2 组间的 _miR-132、miR-150、miR-197、miR-99 表达有显著差异，而miR-197及miR-99与肝纤维化进程 密切相关，提示其可作为NASH发生、发展的诊断分子标 志物。

miRNA与自身免疫性肝病及药物性肝病

自身免疫性肝病是由人体免疫系统对自身组织的抗原 丧失免疫耐受，从而诱发肝脏受到免疫攻击的疾病，其中包

括自身免疫性肝炎、原发性胆汁性胆管炎（primary biliary cholangitis, PBC丨、原发性硬化性胆管炎及重叠综合征等。 PBC是一种由免疫介导的小胆管上皮细胞损伤及胆汁淤积 性自身免疫性肝病，主要表现为肝内小胆管进行性破坏伴 门脉炎症性改变，最终可导致肝纤维化及肝硬化。探索 miRNA在PBC中的作用是最近科学及临床研究的热点。 Padgett等^对PBC患者和正常人进行miRNA表达谱检测， 发现了 35个明显差异表达的miRNA。随后，其对这些 miRNA进行PCR验证，结果显示，miR-122a和miR-26a在 PBC肝组织中表达下调，miR-328和miR-299的表达水平则 呈上调趋势，提示这4个miRNA可作为PBC可能的诊断标 志物。Banales等[³²研究发现，PBC患者较正常人胆管上皮中 的miR-506表达显著增加，同时主要参与细胞内pH值的稳 定和刺激胆汁中碳酸氢盐分泌的C1^_/HC03^负离子交换因 子 2(anion exchange 2, AE2)的 mRNA 表达下调，并进一'步 发现在人胆管细胞中加人anti-miR-506可改善AE2的活 性，提示miR-506可作为PBC可能的诊断标志物，在一定程 度上指导临床诊疗。

药物性肝损伤或药物性肝病是指在使用某种或几种药 物后，由药物本身或其代谢产物而引起的肝脏损害。近年来 的研究多聚焦于寻找药物性肝损分子标志物及建立诊断方 法，其中寻找血清miRNA作为其特异性的诊断标志物是近 期的研究热点。Wang等f³³]构建了药物性肝损伤动物模型，对 比分析后发现，药物性肝损组的血清miR-122和miR-192 表达量较正常对照组有明显差异，而其表达水平与血清转 氨酶水平及肝脏组织病理学相关，且这2个miRNA表达量 的改变出现得更早，提示miRNA可作为药物性肝损伤的血 清诊断标志物。另一项研究表明，对乙酰氨基酚所致肝损伤 患者的 miR-122、miR-155、miR-125b 和 miR-146a 水平明显 增加，提示以上miRNA可作为对乙酰氨基酚肝损伤的分子 标志物^[34]。

miRNA与肝纤维化

多种慢性肝病的临床及病理演变提示，肝纤维化是慢性 肝病至肝硬化发展的必经阶段，肝星状细胞被激活，随后产 生以胶原蛋白为主的细胞外基质是肝纤维化发生的关键。Ji 等^的研究表明，miR-27a和miR-27b可刺激肝星状细胞活 化，减少肝星状细胞增殖，而对其凋亡没有影响。Venugopal 等^对大鼠进行胆管结扎肝纤维化建模，并对其进行miRNA 表达谱分析，发现在肝纤维化模型组的肝星状细胞细胞中 miRNA-150和miRNA-194表达下调，过表达可使ot-SMA和 I型胶原表达下降，推测这2个miRNA可作为肝纤维诊断 及治疗靶标。Guo等^发现，肝星状细胞活化过程中有12个 miRNA表达上调，9个miRNA表达下调，其中miR-15b和 miR-16可直接诱导肝星状细胞凋亡。Murakami等^[38]用 CCU进行小鼠腹腔灌注建立肝纤维化模型，分别取4周、 6周、8周小鼠的肝组织进行miRNA表达谱检测，发现1^11- 199a、miR-199a*、miR-200a 和 miR-200b 的表达量与其肝纤

维化分期呈一致性改变，其过表达可使肝星状细胞中的纤 维化相关基因的表达明显增加，推测这狴miRNA可作为肝 纤维化诊断及治疗的靶点。一项CC1₄诱导的动物肝纤维化 模型实验中则发现，miR-29家族(miRJQawilWPlKmiR- SQcO 在肝纤维化模型中显著下调 ，而 miR-34 家族 (miR-34a、 miR-34b、miR-34c)的表达上调^[39]。Ogawa等^[40]的研究表明， miR-29b可通过与I)胶原基因3'非编码区结合，抑制其 表达，从而阻滞肝纤维化发生。同时，在进展期肝纤维化患 者血清中miRNA-29a的表达水平较正常组及轻度肝纤维化 组低％,提示miRNA-29家族可作为肝纤维化潜在的诊断标 志物及治疗靶标。Wang等[⁴²]通过检测血清miRNA发现， miR-181b在肝纤维化及肝硬化患者中的表达较正常人明显 增加，且该miRNA可通过细胞周期调节因子p27促进肝星 状细胞增生，提示miR-181b可作为肝纤维化潜在的分子诊 断标志物。

总 结

总之，在过去几年里，对于miRNA的研究已取得了很大 的进展，并发现了在慢性肝病及肝纤维化中发挥重要作用 的miRNA,为慢性肝病及肝纤维的早期非创伤性诊断、鉴 别、发病机制的研究及治疗导向方面提供了新的思路。然 而，miRNA表达谱检测方法存在的差异、不同的生活环境及 人种遗传性不同、动物模型建立方法的不同，可能导致不同 的报道对于同样的肝脏病变发现的差异miRNA结果并不一 致相同。同时，对于外周循环中的miRNA分泌机制、动力学 特点及其清除机制目前尚未完全明确，对于这些问题尚需 进一步探索和研究。

成都华西华科研究所

研发生产无创肝纤维化肝硬化早期检测诊断仪

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