肝活检病人血清纤维化指标的检测与无创肝纤维化肝硬化早期检测诊断方法

 [摘要]①目的成都华西华科研究所研究探讨血清肝纤维化指标与慢性病毒性肝炎纤维化程度的关系及其临床应用价值。②方法 对366例慢性乙型病毒性肝炎病人进行了肝组织活检，同时检测其血清脯氨酸肽酶（PLD)、F型胶原（CIV)、I型 前胶原氨基端肽（PINP)、层粘连蛋白（LN)、透明质酸（I-IA)含量，比较肝组织炎症和纤维化程度与血清肝纤维化 指标的关系，并分析了肝纤维化指标与肝功、血常规之间的相关性。③结果按肝脏的炎症程度分组，各组间 PLD、CIV差异无显著性（F=l. 79、1. 91，P>0. 05);PINP G4组较G1、G2升高，差异有显著意义（F=42. 33，g = 3.20、4. 12，P<0. 05、0. 01，）；LN水平随着炎症程度加重而增高，G1组与G2、G3、G4组比较差异均有显著性（F= 23. 48,g=3. 17%3> 89,_P<0. 05)_;G2、G3、G4 组的 HA 水平较 G1 组增加，差异有显著意义（F=23. 03,g=3. 22% 3. 97，_P<0. 05)%按肝脏纤维化程度分组，各组间比较，PLD差异无显著性（F=1. 82，_P>0. 05)_;C*、LN、HA水 平随着纤维化程度的加重而增高，S4组显著高于其他各组（F=3. 18%20. 34,g = 4. 12%6. 04,_P<0. 01) ;P)NP水 平随着纤维化程度的加重而增高，S0组与S1、S2、S3、S4各组比较差异有显著性（F= 37. 84，g=4. 75%7. 31，_P< 0.05、0.01)。纤维化相关指标与总胆红素、直接胆红素、球蛋白、谷丙转氨酶呈显著正相关（r=0. 42%0. 63，P<

0. 05)，与清蛋白、前清蛋白、白细胞、红细胞、血小板呈显著负相关（r=一0.51   0. 79，_P<0. 05)，与2-谷氨酰转

肽酶、碱性磷酸酶无明显相关性（r=0. 03%0. 09，_P>0. 05)%④结论 C*、LN、HA水平可作为判断肝脏炎症和 肝纤维化程度的参考指标，与肝功、血常规联合检测的参考价值更大。

[关键词]肝炎，病毒性，人；肝硬化；血清学诊断

肝纤维化是各种慢性肝病发展至肝硬化的必经 阶段。肝纤维化的早期诊断和早期治疗对防止病变 的进一步发展有重要作用。肝活检特别是多次不同

[收稿日期]2003-01-02;[修订日期]2004-01-05 [作者简介]王启娟（I960-)，女，主治医师。

部位的肝脏穿刺病理组织学检查是当前诊断肝纤维 化的金标准，但临床上作为常规检查实施很困难。 故目前国内外专家致力于肝纤维化的血清学诊断研 究。我们检测了 366例经病理诊断证实的慢性乙型 病毒性肝炎（慢乙肝）病人血清肝纤维化相关指 标——脯氨酸肽酶（PLD)、*型胶原（C*)、）型前

胶原氨基端肽（P)NP)、层粘连蛋白（LN)、透明质 酸（HA)水平，旨在探讨这些血清肝纤维化相关指 标对慢乙肝纤维化程度的诊断价值。

1资料与方法

1.1 对象及分组

慢乙肝病人366例，为第二军医大学附属长海 医院感染科1999年1月〜2000年10月期间住院 行肝穿刺活检病人，男272例，女94例；年龄16〜 65岁，平均33. 27岁。所有病例均于入院后1周内 在B超定位下行肝穿刺活组织病理检查，穿刺采用 14〜16G Quick-core针（美国COOK公司生产）。 肝组织标本长度不小于1 cm，获取后用40g/L甲 醛溶液固定后乙醇脱水，用二甲苯清洗后石蜡包埋， 5 ,m厚切片，置于载玻片上，二甲苯去蜡，乙醇逐级 脱水。伊红-苏木精染色，乙醇逐级脱水，二甲苯清 洗2次，常规封片，显微镜下观察。根据2000年西 安全国第十次病毒性肝炎会议修订诊断标准^[1]，将 慢乙肝病人按肝脏病理炎症程度不同分为G1、G2、 G3和G4组，按肝脏病理纤维化程度不同分为S0、

S1、S2、S3 和 S4 组。

1.2检测方法

病人入院第2天采集肘静脉血，P)NP、C*、 LN、HA检测采用双抗体夹心酶联免疫方法。PLD 检测采用标准比色法。试剂由上海茂元科技公司提 供，检测由长海医院感染科实验室完成。肝功能和 血常规指标检测由长海医院实验诊断科完成。

2结 果

2.1血清纤维化指标与肝脏炎症程度的关系

慢乙肝不同炎症分级各组间PLD差异无显著 性（F=1. 79，P>0. 05#C*水平随着炎症程度的 加重而增高，但各组间差异无显著性（_F=1. 91，P>

1.  05_);PniNP G4组较G1、G2组升高，差异有显著 tt(F = 42. 33,₉ = 3. 20,4. 12,P<0. 05,0. 01,)； LN、HA水平随着炎症程度的加重而增高，G2、G3、 G4组与G1组比较，差异均有显著性（F= 23. 48、 23. 03，g=3. 17〜3. 97，P<0. 05:)。见表 1。

2.2血清纤维化指标与肝脏纤维化程度的关系 慢乙肝不同纤维化分期各组间比较，PLD差异 无显著性（F=1. 82，P>0. 05);C*、LN、HA 水平 随着纤维化程度的加重而增高，S4组显著高于其他 各组（F=3. 18〜20. 34，g=4. 12〜6. 04，P<0. 05、 0. 01) ;P)NP水平随着纤维化程度的加重而增高， S0组与S1、S2、S3、S4各组比较差异有显著性（_F =

1.1    84，g=4. 75〜7. 31，P<0. 05、0. 01)。见表 2。 2.3纤维化指标与肝功能、血常规指标的相关性 纤维化相关指标与总胆红素(TB)、直接胆红素 (DB)、球蛋白（G)、谷丙转氨酶（ALT)呈显著正相 关（r=0. 42〜0. 63，P<0. 05)与清蛋白（A)、前清 蛋白（PA)、白细胞（WBC)、红细胞（RBC)、血小板

(PLT)呈显著负相关（r=—0. 51    0. 79，？<

0. 05)，与2-谷氨酰转肽酶（2-G')、碱性磷酸酶 (AKP)无明显相关性（r = 0. 03〜0. 09?>0. 05)。

表1血清纤维化指标与肝组织学炎症程度的关系

组别	P	LD1/U * L-1)	C* "/,g * L-”			LN"/,g * L—!)	P)NP"/,g * L-”			HA"/,g * L—!)
	n	:c 士 ^	n	工士 s	n	工士 s	n	士5	n	士5
G1	152	993. 84X 28. 92	149	62691士 9604	135	83600士 3610	148	22688士3678	98	120616士 17662
G2	143	1 060. 00士 38. 86	142	84650士 7620	133	107.20士 6. 33*	143	22653士9637	89	422630士117650*
G3	56	1 087.86士 68.28	55	99625士16699	49	112. 04士 8. 58*	52	42614士2616	54	431691士187648*
G4	15	909. 00士 113. 01	15	107600士33637	15	121600士30676*	15	57.05 士 7.955	15	449675士129625*
与 G1 比较，_F=23. 48、23. 03,			* 1=	3 17%3 97，?<0605	;与 G2 比较，_F=42. 33,		51 = 3. 20、4. 12?<0.05
				表2血清纤维化指标与肝组织学纤维化程度的关系
组别	P	LD1/U * L-”	C* ",g * L—!)			LN"/,g * L—!)	P)NP"/,g * L-”			HA"/,g * L—!)
	n	JC 士^	n	工士 ^	n	工士 s	n	士5	n	士5
S0	97	952. 0士35.82	96	59624士12686	80	93643士 7688	64	12644士 2616*	60	100694士17609
S1	107	1 062.0士42. 24	106	66676士 7647	97	95658士 4685	83	27654士 4625	72	197618士38695
S2	67	1 017.0士49. 28	67	79652士12685	59	108678士 9679	60	29687士 6688	60	223667士35658
S3	61	1 088.0士 62. 37	60	86693士 7651	56	109667士 8622	60	36608士 5622	60	267604士51671
S4	34	1 080.0士78. 95	34	141656士25687*	31	145694士12685*	30	43638士16649	30	851643士92639*

与其他各组比较，F=3. 18%37. 84, * g=4. 12%7. 31，？<0. 05、. 01

3讨 论

正常情况下，肝内细胞外基质（ECM)作为细胞 的支架处于一种合成与分解的动态平衡状态，肝纤 维化时这种平衡被打破，即合成超过降解，使其在肝 内沉积过多，相应地出现血清ECM各成分的增高， 是肝纤维化的主要病理变化之一。国内外己报道的 与ECM代谢异常密切相关的血清指标主要有：胶 原蛋白I型、）型、*型、LN、纤维连接蛋白（FN)、 HA、单胺氧化酶（MAO)、PLD、基质金属蛋白酶 (MMPS)及其组织抑制因子（'IMPS)等^[2]。

本文对366例慢性乙肝病人血清PLD、C*、 P)NP、LN、HA成分进行检测，并与肝组织病理诊 断结果进行对比，结果显示，C*与炎症和纤维化程 度都有相关性，但与纤维化的相关性更高，即它对肝 纤维化诊断有意义。

国外动物实验及对慢乙肝病人血清检测结果显 示，PLD仅在肝纤维化早期升高^[34]。而国内报道 则倾向于认为P LD与肝脏炎症及纤维化均有相关 性^[5,^6]。但在本文实验中均未得到证实，故认为其 检测的临床意义不大。

P)NP在肝脏轻度炎症时增加不明显，随着慢 性肝炎活动性病变及纤维化程度加重而显著增加， 较可靠地反映了肝纤维化的程度和肝组织学改变， 是诊断肝纤维化的良好参考指标之一，且对慢性肝 病的预后判断也有意义。

正常人血清中LN的浓度较低，肝纤维化时明 显升高，其升高的程度与慢性肝纤维化和炎症的程 度呈正相关^[A]，本文结果与其相符，尤其在肝硬化时 LN的水平增加显著，是诊断肝硬化的良好参考指 标之一。目前LN用于诊断肝纤维化的结论不一， 多数研究结果显示，LN与肝纤维化呈正相关，与炎 症无明显关系^[8，^]。但是，也有不少报道显示LN与

肝纤维化和炎症程度均无相关性，对诊断无参考价

值[10~12]

血清HA水平随着肝炎的发展逐渐增高，主要 原因是炎症活动时HA释放入血增加和肝窦内皮 细胞清除减少以及肝硬化时进入肝脏的血液减少。 血清HA是始终的敏感指标，与纤维化程度密切相 关，对区分肝硬化和肝纤维化有一定价值^[13]。

本文结果还显示，ECM成分与'B、DB、G、 AS'呈显著正相关，与A、PA、WBC、RBC、PL'呈 显著负相关，提示它们可作为反映肝组织学炎症、纤

维化的参考指标，结合临床分析，其中有实质性意义 的相关指标应为G、A、PA、WBC、RBC、PL'，尤其 是A、PL'两个指标与肝纤维化程度关系最密切。 ECM成分与'B、DB呈显著正相关，原因主要是随 着纤维化的加重，肝细胞分泌胆盐入胆小管减少，肝 内小胆管和毛细胆管基膜增厚，管腔阻塞，胆汁排泻 不畅等引发胆汁淤积。

综上所述，血清PLD、CF、PIIINP、LN、HA水

平能反映肝组织学炎症、纤维化的程度，检测血清 CF、PINP、LN、HA水平对肝纤维化诊断有很大 的参考价值，检测CF、LN、HA对肝硬化的诊断有 很好的参考价值，C]V、P^INP、LN、HA与G、A、 PA、WBC、RBC、PLT等指标联合检测对诊断的参 考价值更大。

成都华西华科研究所研发生产无创肝纤维化肝硬化早期检测诊断仪

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