血清粗纤维调节素检测对诊断肝纤维化的临床价值与无创肝纤维化肝硬化早期检测诊断方法

肝纤维化是肝内细胞外基质 CECM)过多沉积所致，其发生、发展宜 接影晌病人预后。粗纤维调节索(Un- dulin，Un)是近年发现的一种ECM糖 蛋白.有关其临床研究的报道尚少"• 汽我们在提纯人胎盘Un和制各其特 异性抗血清的基础上，建立了检测血 淸Un的竞争抑制EUSA法，检测143 例肝病，30例非肝疾病和60名健康献 血员，旨在探讨其对肝纤维化的临床 诊断价值。

材料与方法

一、 检测对象

(一)肝病(LD)组：共143例，其中急 性肝炎（AH)15例；慢性肝炎轻度 (CH1)29例.中度（CH2)16例，$度 (CH3)20例;肝炎后肝硬化(LC) “例。 以上诊断均按1995年全国传染病寄生 虫病学术会议修订的诊断标准.其 中30例慢性肝炎经病理证实.原发性 肝癌(PHC)19例(伴肝硬化15例)均经 手术和病理证实。

㈡非肝疾病(NL>组：共30例。其 中消化性溃疡20例，慢性胃炎10例。均 经临床及内镜确诊并排除合并肝病 者。

㈢正常对照（NC)组：为60名健 康献血员.

二、 方法

㈠血清Un检測：采用竞争抑制 ELISA法⑷■用0.05mol/LpH9.6 碳 酸盐缓冲液将Un稀释为5#g/ml,加 人酶标板10D#]/孔，4°C过夜;同时以 为初浓度，按1:2稀释成10个 不同浓度的标准Un各lOO/il,连同待 测血清100/d,分別与等量抗人Un兔 IgG(滴度1:1000)混合,4T过夜。次曰 用10%小牛血清針闭酶标板各孔包被 的Un,37*C孵育1小时,分别加人上述

作者单位：200003上掸市，第二军医大学长 征医院(姚定康> 李石)；第二军医大学临床免疫 屮心(孔宪涛、谢映华）

不同浓度的标准Un和待测血清与抗 体反应物100/il,37T孵育40分钟， PBS(^0.05H Tweeti-20)St^3ifc. 加HRP-羊抗兔IgG(华美公司产品. 效价1:1000), 37^SC反应1小时，洗涤3 次，加邻苯二胺底物显色15分钟， 2mol/L H₃SO*50fil终止反应、在全自 动酶标仪上测各孔492mm A(吸光度) 值.每次检测均设零孔、阳性对照孔及 质控血清复孔。以阳性对照孔的A值为 B。，其余孔为B,建立标准曲线并计算 待测血清Un含量.

㈡血清透明质酸(HA),层粘连蛋 白（ln)和m租前胶原氣基端肽（pm NP>检測:均采用放免法(HA、LN试剂 盒为本烷及上海海军厘学研究所产 品.PHI NP试剂盒为芬兰Orion Diagnostica公司产品)》

㈢肝组织学炎症和纤维化分 级：30例慢性肝炎肝活检标本，按 1995年全国传染病寄生虫病学术会议 修订的慢性肝炎病理分级分期标准 ^[s]，将炎症活动度分为四级，肝纤 维化程度分为Sh五期。

1.  统计学分析

数据以均数±标准差（I±s)表 示;组间显著性差异采用t检验;血清学 指标相关性采用线性相关分析;血清 Un与肝组织学改变相关性采用秩相 关分析。

结 果

1.1    竞争抑制ELISA法的鉴定

血清Un最小测量值为5/jg/L,批

内和批间变异系数分别为7.5和7.9,回 收率为96.6 % ~108.3%,线性良好.

二、 血清Un检测

结果见附表。各肝病组血淸Un水 平均显著高于NC及NL组均<0. 01)。慢性肝炎CH1、CH2、CH’3三组间 差异均有显著性(P均<0.01)。LC及 PHC组均显著高于AH及CH1组均 <0.01).LC及PHC两组间，以及NL 与NC两组间差异均无显著性(户均>

2.  05)。在PHC组中,4例不伴肝硬化忠 者，其血清Un值分别为175、200、220

和 235f(g/L。

附表各组血清Un检测结果

组别	例软	Un浓度
NC	60	7U4 土 29.6
NL	30	93.23 土 30.47
HA	15	L43.D6 ±48.97	<0.01,
CHI	29	1B9.27 土 44.86	<0.01*
CH2	16	234.22 土 35,18	<0.01+Jl
CH3	20	286.20 土 66.02	<0.01f
LC	44	236.21 土 98.03	<0.01^
PHC	L9	278.89 土 90.0L	<0.01^

■V与NC组和NL组相比相比 *:与CH2组相比

2.2  血清Un 与PIIINP'LN、HA 的相关性

血清Un水平与血清PIIINP,L：N 和HA水平间均无明显相关（「分别为

[8]                 117. -0.175和0.25.P均>0.05).

2.3  血清Un水平与肝组织学炎症 活动度(G)和肝纤维化程度(S)均呈正 相关（「分别为0.52和0.78,P值分别<

111]          05 和 <0.001)。

2.4  血清Un判别肝纤维化的敏感 性与特异性

以病理肝纤维化评分S,~*期的26 例慢性肝炎和44例肝炎后肝硬化为肝 纤维化阳性病例，15例急性肝炎和4例 病理肝纤维化评分S。期慢性肝炎为肝 纤维化阴性病例，以最高诊断准确率 (73.03%)的血清1111值(200呢/1^为肝 纤维化的判别值，则其对肝纤维化诊 断的敏感性为71.43舛，特异性为 78.9 H。

讨 论

Un是1990年才被确认的一种大 分子非胶原ECM铕蛋白，在体内与成 熟的粗纤难胶原(I.m租胶原)共同分 布.与I型胶原I亚链上的胶原酶解位 点有特殊的亲和性，当胶原纤维降解 或结构改建时.则随之脱落进人血循

 中华消化杂志1995年2月第18卷第1期

■6 L-

环。有关Un的临床研究报道自前K见 Schuppan和Shahin两篇^[”.我国慢 性肝病主要由肝炎病毒引起，本文结 果表明，急慢性病毒性肝炎，肝炎后肝 硬化及原发性肝庙病人血清Un均显 著高于正常;轻度、中度和a度间亦差 异均有显著性。进一步对比研究发 现，血淸Un水平虽与肝组织学纤维化 程度密切相关（r=0.78'<0.001),但 与肝脏炎症活动度也相关(r = 0.52，尸 <0.05),且急性肝炎病人也增高，表明 肝病病人血清Un的增高.既反映肝脏 的纤维化，也能反映肝脏的炎症.为 此，我们将15例急性肝炎和4例组织学 证实无纤维化的谩性肝炎作为肝纤维 化阴性病例，将44例肝炎后肝硬化和 26例组织学证实有不同程度纤维化的 谩性肝炎作为肝纤维化阳性病例.以 血清Un>200pg/L为肝纤维化的阳 性判别值，则对诊断肝纤维化的琺感 性为71.43%,特异性为7S.9M,诊断准 确率为73.03、

搜性肝病病人血淸Un含量升高 的确切机制尚不淸楚，一般认为是由 于肝脏成熟结缔组织洚解时的脱落 ^m，因此，它是反映纤维化肝脏结缔组

&卜^

织降解和结构改建的指标，即反映纤 维降解(fibrolysis)的指标，而非反映 纤维生成(fibrogenesis)的指标^17]•本 组4例不伴肝硬化的原发性肝癌病 人，血濟Un含量也增高，其机理有待 进一步阐明.

本文结果还表明，血清Un含量与 血濟HAiPfflNP和LN水平均无显著 相关，这与文献报道一致^[义提示它与 上述等其他肝纤维化血清学指标，尤 其是反映纤维生成的血淸学指标联合 检测.更有助于肝纤维化病情及发展 趋势的判断。

Un存在于全身结缔组织，与其他 ECM成分一样，某些胶原性疾病时其 血淸含貴也可能升高.加之其降解和 排泄途径以及肾功能不全时是否影响 其排泄均不详，本文非肝疾病组的病 种又极有限，因此，用以辅助诊断肝纤 维化时.应排除上述可能与之有关的 非肝疾病和PHC的存在.

  成都华西华科研究所研发生产无创肝纤维化肝硬化早期检测诊断仪

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