慢性乙型肝炎患者HBV-DNA水平和肝纤维化相关指标的

检测、相关性分析与无创肝纤维化肝硬化早期检测诊断方法

摘要：目的探讨慢性乙型肝炎患者血清HBV-DNA水平与肝纤维化血清指标之间的关联。方法用实时荧光定量PCR 法检测HBV-DNA水平、用化学发光法检测肝纤维化指标：透明质酸、IH型前胶原、1Y型胶原、层粘连蛋白。结果 110例乙型肝 炎患者血清HBV-DNA水平（对数值）为5. 32±1. 37,透明质酸水平为（197. 81 ±85. 37)mg/mL, HI型前肢原水平为（142. 66士 30.28)邱/111乙，汉型胶原水平为（90. 34±20. 53)冲/〇1乙，层粘连蛋白水平为（143. 96 士 31. 79)冲/11^，均高于对照组（P<0. 01)。 患者血清HBV-DNA水平与肝纤维化4项血清指标之间的相关彳生较弱，无统计学意义（P>0. 05)。结论慢性乙型肝炎患者肝 纤维化4项血清指标上升，但患者血清HBV-DNA水平与肝纤维化血清指标检测值之间没有显著的相关性。

关键词_.DNA，乙塑肝炎病毒；肝纤维化；慢性乙型肝炎

肝纤维化是指肝内纤维结缔组织的过度沉积。慢性乙型 肝炎长期不愈或反复发作会导致肝纤维化并发展成肝硬化，最 终有可能演变为肝癌^D2]，肝纤维化若能被早期发现并得到及 时与合理的治疗，完全可以被控制并有可能被逆转^[3]。为了探 讨慢性乙型肝炎患者血清HBV-DNA水平与肝纤维化之间的 相关性，为慢性乙型肝炎的治疗和预后判断提供依据，笔者对 慢性乙型肝炎患者血清HBV-DNA的水平和与患者肝纤维化 程度相关的4项血清指标进行了联合检测，现报道如下。

1资料与方法

1.1 一般资料选取2012年10月至2013年12月在延安大 学医学院附属医院感染病科门诊就诊和病房住院的慢性乙型 肝炎患者110例作为患者组，男62例、女48例，平均（47. 2士 13. 6)岁。另外，选取同期在延安大学医学院附属医院体检门 诊做体检的110例健康体检者作为对照组。对照组与患者组 在性别构成和平均年龄上差异无统计学意义（P>〇. 05)。

1.2方法所有受试者均于清晨空腹时静脉抽血5.0 mL，立 即离心分离得到血清，于一20 'C保存待检。用实时荧光定量

PCR法检测患者血清HBV-DNA水平，使用的仪器为美国 ABI公司7900高通量实时荧光定量PCR仪，检测试剂由厦门 安普利生物工程有限公司提供。用化学发光法测定反映肝纤 维化程度的4项血清指标：透明质酸（HA)、IM型前胶原（PC 111)、1¥型胶原((：汉）、层粘连蛋白（1^1)，使用的仪器为德国西 门子公司生产的全自动化学发光仪ADVIA Centaur,化学发 光试剂由厦门波生生物技术有限公司提供。所有操作均严格 按照仪器和试剂说明书的要求进行。

1.3统计学处理采用SPSS 15.0软件进行统计分析，计量 资料用表示，组间比较用t检验，多组间比较采用方差分 析，用直线相关作相关性分析，P<〇. 05为差异有统计学意义。 2结 果

2.1两组受试者血清HBV-DNA水平与肝纤维化相关指标 的比较患者组的血清HBV-DNA水平（原始数据取对数 值），肝纤维化4项血清指标（HA、PCIH、C1V、LN)均显著高于 对照组，差异有统计学意义（P<〇. 01)，见表1»

表1  患者组与对照组血清HBV-DNA肝纤维化指标的比较(王士s)

组别	n	HBV-DNA	HA(mg/mL)	PCM (fiig/mL)	CIVC^g/mL)	LN(^g/mL)
患者组	110	5. 32±1. 37	197. 81±85. 37	142.66士30. 28	90. 34±20. 53	143. 96±31. 79
对照组	110	2. 16 士 0.83	62. 57士 25. 04	81.72土23.17	43. 21±11. 48	90.89士21.33

 表2 不同HBV-DNA水平的肝纤维化4项指标之间的比较(王士.s)

患者 HBV-DNA 水平（IU/mL)	n	HA(mg/mL)	PCH (/ig/mL)	C]Y (^ig/mL)	LNCjug/mL)
<103	30	186. 17±84. 75	132.61士29. 16	76_32士18.01	127. 06±32. 30
103 〜lO15	52	197.06±85. 43	142.05士31.43	89. 52±21. 36	U4.70±31.63
>10fi	28	210.20士85.93	153.32士30.25	105. 18±22. 22	170.12士31.44

1.  HBV-DNA水平不同的患者肝纤维化指标的比较 3组 不同 HBV-DNA 水平范围（<10³ IU/mL、10³ 〜10⁶ IU/mL、> 10⁶ IU/mL)的患者，肝纤维化4项指标（HA、PCIH、C]y、LN) 比较，差异无统计学意义（P>〇. 05)，见表2。

2. 3 HBV-DNA水平与肝纤维化指标的相关性分析 HBV- ONA水平与4项肝纤维化指标间的相关性无统计学意义 (P>0.05)，见表 3。

表3 患者组血清HBV-DNA不同水平与4项肝纤维化 指标的相关性

统计值	HBV-DNA	HBV-DNA	HBV-DNA	HBV-DNA
	与HA	与PCffl	与civ	与LN
r	0. 227	0. 246	0. 298	0. 365
P	0. 169	0. 155	0. 124	0. 097

3讨 论

肝纤维化是肝内纤维结缔组织增生和分解不平衡的结果， 表现为肝内细胞外基质的弥漫性过量沉积，是慢性肝病向肝硬 化发展的必经阶段，但这个阶段仍具有可逆性^[24]。HA、PC HI、C1Y、LN均为细胞外基质，参与肝纤维化的发展过程，HA 属蛋白多糖，PCm和CIV为胶原纤维成分，LN是非胶原结构 的粘连糖蛋白，肝纤维化时，以上成分的水平均明显增加，

4项肝纤维化指标（?1八、？(：111、(：1¥、1^)中以^1六的诊断 价值最高^[5]。肝脏内HA主要由纤维母细胞合成，由内皮细 胞摄取、降解。如果纤维母细胞对HA合成增加或内皮细胞 对HA摄取降解减少，则可导致血清中HA水平升高。有报 道指出，HA诊断慢性肝脏疾病出现肝纤维化的准确度可达 89. 19%，特异度可达93. 00%^M。肝纤维化相关的4项指标 水平的动态变化与肝纤维化的活动性密切相关。

本研究组检测了慢性乙型肝炎患者血清HBV-DNA水平 和4项肝纤维化指标，结果显示110例慢性乙型肝炎患者4项 肝纤维化指标均比对照组升高，但患者血清HBV-DNA水平 与肝纤维化4项指标的水平并无明显关联。关于HBV-DNA 水平与肝脏组织学改变及肝纤维化之间的关系，文献的报道并 不一致^[7^^]，不同专家对此持有不同看法。

有文献报道，DNA水平与肝纤维化指标没有相关性，其原 因可能是：慢性乙型肝炎的发病机制非常复杂，HBV的增殖并 不是肝脏损伤的唯一原因，人体的免疫因素、肝功能状态以及 乙型肝炎e抗原等亦可能与之相关。在慢性乙型肝炎的免疫 耐受阶段，肝细胞内HBV复制相当活跃，而肝脏组织学却没 有明显的异常•，随着免疫耐受消失，免疫清除作用开始活跃，此 阶段的肝脏损伤主要是免疫病理损伤，免疫反应虽然可以清除 病毒，使HBV水平降低，但同时也造成肝脏损伤，若长期持续 可促进肝纤维化的发生、发展。

患者血清HBV-DNA水平与多数慢性乙型肝炎的急性发 作有密切关系，HBV的增殖直接促进人体免疫反应导致的肝 细胞损伤，故HBV的持续增殖可以是肝纤维化的诱因；但是 HBV-DNA水平降低时并不一定伴随肝纤维化的减低，肝纤维 化仍可持续进行，后者是因为机体免疫系统清除病毒的同时也 引发了对肝细胞的免疫病理损伤，随之而来的是肝组织的反复 修复与最终出现纤维化^[1113]。

但另有文献报道，慢性乙型肝炎患者血清HBV-DNA水 平与血清肝纤维化指标有一定关联^[14]。研究中的两组患者在 治疗开始前血清肝纤维化指标没有显著差异，但经5年有效抗 病毒治疗后，两组患者的血清肝纤维化指标包括血清HA、PC IH、Ciy、LN均有显著性差异；尤其是，非抗病毒治疗组大部分 患者血清HA、PCHI、CW、LN均显著高于参考范围。结合长 期抗病毒治疗期间血清肝纤维化4项指标与患者血清HBV- DNA水平的动态变化，作者认为有效进行抗病毒治疗和控制 慢性乙型肝炎患者血清HBV-DNA水平，对延缓或控制慢性 乙型肝炎患者肝纤维化的进展有重要的意义^[〜。

  成都华西华科研究所研发生产无创肝纤维化肝硬化早期检测诊断仪

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