HA'LN'CIV 'PCDI与HBV—DNA含量联合检测 在肝纤维化诊断中的临床意义与无创肝纤维化肝硬化早期检测诊断方法

 [摘要]目的成都华西华科研究所研究探讨血清四项肝纤维化指标透明质酸(HA)、层粘连蛋白（LN)、IV型胶原(CIV)和m型前胶原(PC m)在肝纤维化非创伤性检查中的临床意义，同时初步观察四项肝纤指标与乙肝病毒（HBVDNA)复制指标之间的关系。 方法100例肝病患者血清中只八、1^、0\「、1^111检测用放免法（1?认）_；对其中88例乙肝患者血清^16\^^八含量及乙 肝病毒标志物(HBVM)分别用荧光定量PCR(FQ-PCR)及酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测，并进行比较分析。结果 四项肝纤指标在急性肝炎和慢性肝炎轻度、中度、重度者及慢性重型肝炎中有依次升高趋势，差异有显著性（P<0. 05)，而肝硬化组与慢性重型肝炎组比较，HA、PCIII两项略低，而LN、CW明显升高（P<0.05)。同时在乙肝病毒标志物 HBsAg( + )、HBeAg( + )、HBcAb( + )、HBV-DNA 阳性组中血清四项肝纤指标最低，而在 HBsAg( + )、HBeAb( + )、 HBcAb( + )、HBV-DNA阴性组中最高，两者之间有显著差异（P<0.01>。结论四项肝纤指标联合检测对肝病肝纤维 化的临床诊断、治疗提供了准确可靠的依据。同时慢性乙肝患者血清肝纤指标与HBVDNA含量密切相关，这对临床判 断肝纤维化程度和指导抗纤维化及抗病毒治疗有着重要的价值。

[关键词]肝纤维化;HA; LN; CIV ; PC Dh HBV - DNA含量

肝纤维化是不同病因所致慢性肝损伤共有的反 应，也是慢性肝炎向肝硬化发展的必经阶段。有资料 表明：肝纤维化阶段是个可逆的病理过程^[1]。如能于 肝纤早期及时诊断处理，阻断其病理进展，则可防止肝 硬化的形成发展。为此，我们对100例各型病毒性肝 炎血清1^、1^、(：]¥、卩(：111联合检测，同时与？1^\₍^1 及HBV- DNA含量进行比较分析，以探讨其肝纤维 化的非创伤性诊断中的临床应用价值。现将结果报告 如下。

资料与方法

一■、材料

100例病毒性肝炎均系我院肝病科2001年4月 一2001年12月份住院病人，其中男88例，女12例， 年龄15~72岁_D临床诊断均按1995年第五次全国传 染病与寄虫病学术会议修订的《病毒性肝炎防治方案》 标准诊断，其中急性甲、乙型肝炎(恢复期）12例，慢性 乙型肝炎(轻度）16例，中度30例，重度10例，慢性重 型肝炎(乙型）中期患者6例，肝硬化26例。

二，方法

血清HA、LN、CW、PC IE的检测采用放免法 (RIA)测定，试剂由上海海研医学生物技术中心提供，

按说明书操作；HBVM用酶联免疫吸附试验 (ELISA),试剂由上海荣盛生物工程公司提供; HBVDNA含量检测采用荧光定量PCR(FQ-PCR)， 试剂由中山医科大学达安基因诊断中心提供，仪器采 用美国GeneAmpPE5700型实时荧光定量PCR仪。 HBVDNA含量采用其对数值均值表示。

三、统计方法

多组数据间比较采用F检验;两组间比较采用f 检验。

结 果

一、100例各型肝病患者血清四项肝纤维化指标 结果比较

慢性肝炎轻、中、重组随肝受损程度的加剧，四项 指标均依此升高，各组间有显著差异（P<0.05)_D急 性肝炎组与慢性肝炎轻度组相比无差异（P >0.05); 与其余各组均有显著差异（P<〇. 01);肝硬化组与慢 性肝炎轻、中、重度及急性肝炎组相比有显著差异（P <0.01)_;肝硬化组中托\、？(：111略低于慢性重型肝炎 组，而LN、C1V明显高于慢性重型肝炎组（P<0.05久 慢性重型肝炎与慢性肝炎重度组相比均显著升高（P <0.05);尤以凡\、卩(：111升高幅度最大(见表1)。

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表1  100例各型肝病患者血清四项肝纤维化指标结果比较U ± .、)

组号	组别	例数 (n)	HA (ng/ml)	LN (pg/L)	CIY	POE (^g/L)
A	急性肝炎(恢复期）	12	80.4土13_2	117.0±24.2	49.3±12.2	107.3±19.2
B	慢性肝炎轻度	16	91.0土18.0	127. 5 ±27. 5	65.4土16.9	100.8±21.5
C	慢性肝炎中度	30	217_6土54.4	131.4土30.6	70. 2 ±20.7	162. 4 ±50.0
D	慢性肝炎重度	10	393.1 ±118.3	158.3±27.7	121.4±36.9	201.1 ±62.9
E	慢性重型肝炎	6	708,8土157,1	188.6±44.4	159.4 ±47.3	309.2 + 86.9
F	肝硬化	26	535.9土168.1	241.2 ±79.8	197.1 ±50.1	252. 8 ±70.8

F与A、F与B比较P<0.01，F与C、F与D比较  随着肝病变的加重,其四项肝纤维化指标全部升

P<0.05,D与C、D与B比较PC0.05。   高。以慢性肝炎重度、慢性重型肝炎、肝硬化三组的百

二、100例各种肝病患者血清四项肝纤指标升高   分比最高(见表2)。

情况比较

表2各种肝病患者血清四项肝纤维化指标升高情况比较

类型	例数 (n)	全部指标 均正常(n)	%	全部指标 均升高(n)	%
急性肝炎(恢复期）	12	10	83.33	0	0
慢性肝炎轻度	16	8	50.00	0	0
慢性肝炎中度	30	5	16.67	8	26.6
慢性肝炎重度	10	0	0	9	90.00
慢性重型肝炎	6	0	0	6	100.00
肝硬化	26	0	0	23	84.46

三、血清四项肝纤指标与HBVM及HBV-DNA 含量之间的关系

肝病患者其血清中的HBV- DNA含量与四项肝 纤指标有明显相关性,HBV-DNA含量髙者四项肝纤 指标水平较低,HBV - DNA阴性者(D组）四项肝纤指 标水平明显升高,该组患者多为肝硬化，病程较长，机

体在与HBV的长期相互作用中，病毒抗原持续存在, 肝脏损伤持续或反复发生，肝纤维化增生不断发展，虽 然HBV被清除，但长期、反复的肝纤维化增生，随着 程度的加重,肝小叶结构发生改建，假小叶及结节形 成，最终导致肝硬化形成(见表3)。

表3  88例乙肝患者血清四项肝纤指标水平与HBV-DNA及HBVM之间的关系

组别	HBVM 阳性	HBV-DNA 含量 (copy/ml)	HA (ng/ml)	LN (/^g/U	CIV (路几）	pc in
A	1.5	5.1±1.3	208.0 ±82.8	151.7±29.2	81.7±14.0	180.7 + 69.8
B	1.3.5	6.9土 1.5	174.6土63.9	153.0±45.0	105.2 + 93.2	158.8土22.9
C	1.4.5	5.7± 1.1	327.0 ±82. 7	227. 5 土 69.0	135.0 + 37.7	191.3土54.2
D	1.4.5	阴性	534.8土150.9	268.0 ±80.8	198.2 + 67.4	229.8土57.8

注•• HBVM I 为 HRsAg、3 为 HBeAg、4 为 HBeAb、5 为 HBcAb D组与B组、D组与C组四项肝纤指标比较有显著差异（PCO.OIh

讨 论

慢性病毒性肝炎由于机体内致病因素持续作用和 机体免疫功能失调，使细胞受损，纤维组织增生，形成 肝纤维化;其重要病理特点为胶原蛋白，蛋白多糖及粘 连蛋白等多种细胞外基质(ECM)在肝内过度沉积, 但此过程并非不可逆。因此肝纤维化的临床诊断标准 仍以肝组织学检查为目前唯一的“金标准”⑶。由于 肝穿活检为创伤性检查，所取标本有其局限性,难以常

规用于随访和动态观察。因此寻求早期诊断反映肝纤 维化的无创伤性血清学指标成为热点。本文研究表 明，血清四项肝纤指标在各种肝病中随肝损害的程度 而变化，即在急性肝炎与慢性肝炎轻度、中度、重度、慢 性重型肝炎直至肝硬化依次升高。

HA主要由肝间质成纤维细胞合成，由内皮细胞 摄取和降解。若肝成纤维细胞合成增加或肝内皮细胞 受损致HA摄取降解降低，则血清中HA升高。因此, 无论是肝炎性病变或肝纤维化发生，血清中HA均升

高。表1中HA在急性肝炎与慢性肝炎轻度组中无差 别，其余均有显著差别，且肝炎活动越明显，其升高幅 度越大。说明HA的检测与肝脏炎症坏死程度及肝硬 化过程密切相关。LN由内皮细胞及贮脂细胞合成， 与C1V同是基底膜的主要组成成分之一，并参与肝窦 毛细血管化的形成与发展。表1结果表明LN XIV在 急性肝炎与慢性肝炎轻度组，慢性肝炎轻度与中度组 间无差别，其余均有显著差别，说明LNKC1V水平升高 与炎症、肝纤维化有关，是晚期肝纤维化检测的可靠指 标。PCID升高反映肝脏合成ID型胶原加速，表1中 pcm在急性肝炎与慢性肝炎轻、中、重度，慢肝重型肝 炎及肝硬化组间均有显著差异，说明其与肝脏炎症活 动程度和肝纤维化之间有密切的关系。其同HA—样 是反映肝脏炎症和肝纤维化的敏感指标。表2说明联 合检测四项指标，全部升高对肝纤维化的诊断有意义， 但四项指标全部正常，也不能排除有肝纤维化或肝脏 炎症的可能，如慢肝中度组。

有研究资料表明^[4]，在病毒性肝炎患者中随着肝 纤维化分期（S〇 —Sg)的上升，血清HBVDNA含量和 HBeAg阳性率逐渐下降，而HBeAb阳性率升高。本 文资料表3也观察到同样现象，支持这一观点，即血清 HBVDNA 阳性，HBsAg、HBeAg、HBeAb 阳性组中血 清肝纤维化指标最低，而HBVDNA阴性，HBsAg、 HBeAb、HBcAb阳性组中最高，两者有显著差异。 HBVDNA阳性组与HBVDNA阴性组比较，两者肝纤 维化指标有显著差异。说明乙肝病毒复制与肝纤维化 密切相关。因此对于HBV - DNA阳性，HBsAg、 HBeAb、HBeAb阳性组的慢肝炎患者，应动态检测

HBV - DNA含量及肝纤维化指标，以指导临床治疗， 预防肝硬化的发生。

本文研究表明只有联合检测血清四项肝指标对肝 纤维化诊断才有可靠的临床意义，而单一项目检测存 在不足。国内有许多资料也报道了联合四项肝纤维指 标检测结合肝组织结果的对照研究，也证实了四项肝 纤指标与肝纤维化关系密切，即四项指标随肝纤维化 程度加重而升高^[56]。但还需结合临床综合判断，去 除由于炎症等因素的影响，以提高诊断的准确性。为 了指导临床判断病情，估计预后和指导抗病毒治疗，还 应同时检测乙肝病毒含量。

成都华西华科研究所研发生产无创肝纤维化肝硬化早期检测诊断仪

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