超声造影诊断早期肝硬化的实验研究与无创肝纤维化肝硬化早期检测诊断方法

摘要

目的评价超声造影技术在实验兔早期肝硬化定性诊断中的价值。

方法20只新西兰大白兔应用四氯化碳腹腔注射法制备早期肝硬化模型，采用编码相位反转谐波造影成像技术（CPI)，应 用时间-强度曲线（TIC)分析软件，记录肝静脉到达时间（HVAT)及肝动脉到达时间（HAAT)，得到肝动静脉渡越时间 (HAVTT)，观察造模前后所得HAVTT的差异。

结果造模前后HAVTT分别为（6.65±1.00) s，（4.06±0.75) s，两组间比较差异有统计学意义（PC0.01)。

结论HAVTT在实验兔早期肝硬化时明显缩短，可以作为定性诊断兔早期肝硬化的指标。

关键词

超声造影早期肝硬化肝动静脉渡越时间

我国乙型肝炎表面抗原阳性率为7.18%，约 9 300万人感染乙型肝炎病毒，而慢性肝炎、肝硬化、 肝癌这一发展过程，使肝硬化的早期诊治，成为减少 慢性肝病死亡率的关键问题。目前早期肝硬化的诊断 仍然依靠肝组织活检，但因其为有创性，难以在临床 '推广。本文将通过超声造影方法，探讨实验动物早期 肝硬化的诊断。

资料与方法

1.1  研究对象新西兰大白兔20只，雌雄各半， 体质量2.0〜2. 2 kg。以50%的四氯化碳橄榄油溶液 按0.2 ml/kg的剂量腹腔注射，2次/周，共12 周^[1]，给予普通饲料喂养制备早期肝硬化模型。超声 造影前用8%硫化钠脱去肝区体毛，以速眠新0.15 ml/kg的剂量肌肉注射麻醉。

1.2  造影剂、仪器采用GE公司Logiq9彩色超 声诊断仪，编码相位反转谐波造影技术（CPI，coded pulse inversion)，探头型号为3. 5C,机械指数

2007,   08〜0. 12。造影剂选用SonoVue ( Bracco,意大 利），以5 ml生理盐水稀释，震荡混匀，用20G静脉 留置针经耳缘静脉建立静脉通道，连接三通管。

1.3  检查方法采用自身前后对照的方法，在建 立早期肝硬化模型前后均行超声造影检查。首先，常 规二维超声扫查肝脏，选取右肝肋间斜断面，显示肝 中静脉或肝右静脉长轴及肝动脉，选中最佳观察切面 后，探头位置固定。之后，超声仪器进人CPI程序， 经三通管快速团注〇. 3 ml SonoVue，尾随² ml生理 盐水冲管，注射造影剂同时开启超声仪内置造影时 钟，连续储存1 min动态图像于超声仪内置硬盘。

1.4  图像分析回放造影全过程，仪器进入时间- 强度曲线（TIC，time-intensity curve)分析软件， 将感兴趣区分别置于肝动脉及肝静脉，感兴趣区的大 小不超过血管腔，利用仪器的微调装置手动调节感兴 趣区的位置，以尽量避免由呼吸而导致的感兴趣区移 位。仪器自动画出肝动脉及肝静脉的TIC，以造影剂

强度达到峰值的70%为造影剂到达时间，见图1、2, 由此计算出肝静脉到达时间（HVAT)、肝动脉到达 时间（HAAT),再计算出肝动静脉渡越时间 (HAVTT, SIJHVAT-HAAT)。

图1实验兔造模前肝静脉T1C分析图

图2实验兔造模后肝静脉TIC分析图

[1]   病理检查造影结束后，实验兔处死，切取 部分肝脏组织，行HE染色、Masson三色染色及网 状纤维染色等病理组织学染色。早期肝硬化诊断根据 1995年修订的病毒性肝炎防治方案中纤维化4期为 诊断标准^[2]。

[1]   统计分析应用SPSS 11.5统计分析软件， 造模前后TIC测值比较采用前后对照配对《检验。以 PC0.05为差异有统计学意义，pco.oi为差异显 著。

结 果

1.5  造模结果至第12周时，10只经病理证实进 人早期肝硬化阶段（S₄期），剩余1〇只中有6只因 出现腹水、腹壁静脉曲张等肝硬化失代偿表现而死 亡，另外4只尚未到达早期肝硬化阶段。本次研究造 模成功率为50%，说明应用腹腔注射四氯化碳橄榄 油的方法建立动物早期肝硬化模型较为可靠。

2008,   造影结果应用TIC分析法所得造模前

HAVTT ( 6. 65土 1. 00) s，造模后 HAVTT 缩短至 (4.06士0.75)₅，两组间比较差异明显（尸<0.01)， 见表1。

表1   10只实验兔造模前后HAAT、HVAT、HAVTT测

值结果	(X 土 S)		S
TIC测值	HAAT	HVAT	HAVTT
造模前	5. 23士0. 52	11. 88土 1. 36	6. 65土 1.00
造模后	5. 14士0. 48	9. 20士 1. 09*	4. 06士0. 75*

注：与造模前比较•*■?<〇• 〇1

讨 论

由各种致病因子引起肝细胞弥漫性炎症坏死、再 生、诱发肝脏广泛的纤维结缔组织增生、小叶结构破 坏、最后导致假小叶形成，即产生肝硬化。由于肝硬 化假小叶形成导致肝内阻力增加，作为肝内高阻的一 种代偿，肝内肝动脉、门静脉与肝静脉之间出现异常 吻合支，造成肝动脉、门静脉的血液绕过肝血窦直接 进人肝静脉系统^[3<，导致肝脏血液通过时间缩短。 超声造影剂作为良好的血池示踪剂能够反映肝脏的血 流变化，从而能够评估肝脏疾病的严重程度。A卜 brecht等^[5]早在1999年通过超声造影剂观察人的 HVAT，发现小于24 s诊断肝硬化有100%的敏感性 和96%的特异性。131_〇〇1167等^{[6] *}则通过同时测定颈动 脉延迟时间（CDT)，以HVTT<24s及CDTClOs 诊断肝硬化敏感性为100%。认为以 HVAT小于17 s作为诊断肝硬化的界值有100%敏 感性和93. 3%的特异性，并且具有很高的可重复性 (Kappa>0. 9)。刘平等^[8]、华兴等^[9]的动物实验亦 发现肝硬化时HAVTT较正常组明显缩短。但以往 国内动物实验研究结果多以肉眼观察得到，即观察到 造影剂基本充填管腔的时间做为记录时间。这种方法 主观性大，可重复性差。本实验通过TIC分析软件， 仪器自动画出肝动脉及肝静脉的TIC,通过计算，得 出HAVTT,这样避免了人为因素产生的误差，保 证了实验结果的可重复性。

本实验以造影剂到达TIC峰值的70%为 HAAT、HVAT，此时间与肉眼观察到的造影剂基 本充填管腔的时间一致，该方法不仅可以避免由于肉 眼观察产生的人为误差，而且完全可以代替肉眼观 察。国外的临床试验多以造影剂到达峰值的¹⁰%为 HAAT、HVAT^[5a。],结果和国内肉眼观察造影剂 到达时间差异大，不利于结果比较。

HAVTT是以HAAT为校正值得出，可以排除 体循环因素对结果的影响（包括高动力循环状态和肺 动静脉分流），并能够消除因推注造影剂时间与记录

时间不一致造成的偏倚，使其尽可能真实的反映肝内 循环时间，从而更科学证实了早期肝硬化时这种血流 动力学的变化是由于肝内而非肝外的血流改变所致。 本实验观察到兔早期肝硬化阶段（S₄期）HAVTT 明显缩短，可为尽早发现早期肝硬化患者提供理论依 据。

  成都华西华科研究所研发生产无创肝纤维化肝硬化早期检测诊断仪

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