血清I、111、IV型胶原含量对肝纤维化诊断的临床意义与无创肝纤维化肝硬化早期检测诊断方法

本文通过对肝病患者血清I、IIL IV型晈原的检 测，井对其透明质酸（HA)、层粘连蛋白（LN)水平及 病理改变进汙了分析，探讨血清胶原水平与肝纤维化 的相关性.寻找能早期反映肝纤维化的敏感性血清学

指标■!

1对象和方法

肝病患者240例，其中男160例，女80例，平均年 龄36.5岁。包括急性肝炎CAH) 70例，慢迁肝（CPH) 60例，慢活肝（CAH) 80例，肝炎后肝硬化（LC) 30 例，全部病例均按1990年（上海）第六届全国病毒性 肝炎会议修订的诊断标准。健康人39例，均为徤康献 血员,其中男29例，女丨0例，平均年龄31.2岁，无心、 肝、肾、肺等疾患。

240例患者和39例健康人经一夜禁食后于清晨5~6 时采血，离心后取血清，立即置入-20尤冰箱保存待测。

肝活检:240例患者入院I周内用Menghini型针I 秒钟穿刺法取得肝组织,10%福尔马林固定、石蜡包埋 切片、HE染色镜检，由病理科医师作出诊断。

血清晈原含量测定：血清I、m型胶原采用Ren- nard等的EUSA方法，I JII型胶原多克隆抗体由中国 预防医学科学院提供。血清IV型胶原采用一步夹心固 相酶免疫法，标本与包被在珠上的血清IV-C抗体及酶 标抗体同时反应后再与底物及显色剂反应，显色深浅

与血清1V-C的含量相关。试剂为日本第一化学药品株 式会社提供。

肝功能检测：与血清胶原采血同时取血测定血清 胆红素、谷丙转氨酶（ALT)、谷草转氨酶（AST)、•^谷 氨酰转肽酶（Y -GT)、蛋白定量及PCR法测定HBV- DNA〇

L队HA测定：采用海军生物医学研究所提供的放 免法试剂盒，严格按说明书操作，并用西安2®厂的 FJ-2008型全自动Y计数仪测读。

肝纤维化判定标准 I级:正常肝组织，未见明显 纤维结缔组织增生；II级：门静脉区及周围结缔组织增 生;IE级：在II级基础上伴有小叶内结缔组织增生，但 无桥形成;IV级:在in级基础上伴有假小叶形成，

2结果

2.1各组血清I、III、IV型晈原及HA、LN测定结果见

表I。

1.  I、IE、IV型胶原,HA，LN水平与肝纤维化关系见 表2。

2.3血清I、IILIV型胶原水平及HA、LN含量与常规 肝功能试验的关系:将血清I、IE、IV型胶原水平，HA、 LN与血清胆红素、ALT、AST, y-GT、蛋白定量及HBV- DNA进行相关性分析，结果发现，肝病患者的各项纤维 化指标与常规肝功能试验指标及HBV-DNA不相关。

表1各组K孤^型胶原及HA、LN水平(i±j)

		1型胶原	m型胶原	IV型晈原	HA	LN
		Cng/ml)	Cng/ml)	C ng/ml)	(ng/ml)	C ng/ml)
正常人	39	329.5±34.1	355.9i35.0	88.2±24,6	52,S±3CU	279.0±72.6
AH	70	600.6±179.6^	425.3i4E.6	I48.2±50,4	71,0±48.5	314,2±78.5
CPH	60	615,1±100.6^	480.3i52.5	159,6i62,SA	103,2±44.7A	3645±83,8心
CAH	S0		499.9±60,5	344.2±18L9^	301.5i?7.3^	449,8±115t3^
LC	30	898,8±102,9^	604.4*61.4^	546.4*301,5^	50L5±209,5^	604^192.^
	注:A表示与E常人相比较P<0.05或P<0.01, #表示与其他组相比较尺0.〇5或P<〇.〇1。
		表2 I、m、IV型皎Jp、HA及LN与肝纤维化关系(i±j)
		1型胶原	m型胶原	IV型晈原	HA	LN
纤维化程度	n	(ng/ml)	(ng/ml〉	C eg/ ml)	Cng/ml)	C ng/ml)
I级	41	529,4±1〇1.5	476.6i76.t	123,2±53.2	68.2±5〇.2	310.0±66.1
■I级	86	675,5±94.5+i	480,5±7J.9	15412±70.0<e	21K4±14L2*	32S.2±112,0
m级	99	805.5土88,赢	485.1 ±69.8	34&.4±200.1“	325.1±l〇7.1	420.1±158.7^*
IV组	14	935J±64,4*^	4€6,1±50.2	711.2±230J+AA	55L0±121A*^	628.8±179.7*^

注表示n、m'iv与I级比较，时.办▲表示ni、iv级与I丨级比较,j»<a〇5_;厶表示iv级与m级比较,f<o.〇5

3讨论

我们的研究发现尚未发生纤维化的急性肝炎患者 m型皎原也普遍增高，所以尚不能以血清m型咬原水 平作为肝纤维化的诊断依据=I型晈原在ah、cph、 CAH、LC时$明显髙于正常人（P<0.05);事实上，我们 的结果与以往报道有一些出入，在我们的实验中发现 肝硬化早期以I型胶原增多为主，而in型皎原在整个 纤维化病变过程中变化不大*或许是因为in型胶原受 炎症、坏死等其他因素影响较多,难以准确地反映肝纤 维化的程度。IV型胶原civ-c)作为肝脏皎原的一种， 主要分布在肝窦周围，与LN—起构成内皮细胞和肝细 胞之间功能性基底膜我们的结果表明血清IV-C均 值随着CPHiAI^LC顺序升高，且越向LC方向发展 时，血清IV-C值增高越明显，升髙幅度更大，各组间也 存在显著性差异，这有助于连续动态地对肝脏病变及 纤维化程度进行观察，在肝纤维化时出现也很早，非常 适合于肝纤维化的早期诊断。I型胶原虽然也是发生 肝纤维化时的最早指标之一，但它不如IV型晈原特异 性强=

本实验也证实了肝纤维化患者LN和HA合成显

著增加，且与肝纤维化程度及胶原水平均呈正相关，是 早期诊断肝纤维化或肝硬化较为理想的非损伤特异指 标。本实验结果也提示单纯胶原増高，没有非胶原蛋白 异常增加,不能形成肝纤维化;只有非胶原基质蛋白与 胶原同时异常増高，促进胶原在肝脏的沉积，才能导致 肝纤维化及肝硬变的形成。

根据我们对肝纤谁化的分级标准，II级属早期纤 维化,in、iv级为晚期纤维化；因此唯有在in、iv级中的 水平明显高于II级的栺标，才能具有良好的早期诊断 肝纤维化的价值。综合起来，单独检测IV型胶原的诊断 价值优于其他各项指标，联合检測中以IV-C和HA联 合较为理想。

成都华西华科研究所研发生产无创肝纤维化肝硬化早期检测诊断仪

网址:http:// www.qctqct.cn 

手机 : 13072875151传真 :028-65830598

市场部电话 :028-65830598 028-67708638  

在线 QQ:110480527 联系人 : 王先生

邮箱:samwangcn@126.com

地址 : 成都市静康路536号