肝纤维化的血清学诊断进展与无创肝纤维化肝硬化早期检测诊断方法

成都华西华科研究所研究其原理是在碱性环境下，可快速分离 HbA、HbA2和HbF及其他多种变异体。HbA2增高 是P地贫的一个重要特征，HbA2减低常见于a地 贫，如发现异常Hb等则可确诊为相应的血红蛋白 病。全自动电泳分析系统的引进将为我国南方地区 进行地中海贫血及异常血红蛋白病的早期筛査提供 了良好的手段。

5.5 同工酶分析的应用电泳技术用于同工酶的 测定有很多优点，简便快速，分离效果好，且一般不 破坏酶的天然活性，目前已有自动化电泳分析系统 用于同工酶的快速分析与鉴定。同工酶测定在临床 应用很广^[13’^14]，如测定心肌酶谱同工酶作为肌坏死 和心肌损伤的标志物；肌酶谱同工酶测定用于神经 肌肉疾病的诊断和监护•，肝酶谱测定作为肝损害的 指标等。

5. 6脂蛋白电泳的应用脂蛋白用于心、脑血管独 立的危险因子的预测，虽然脂蛋白已有很多测定方 法，但脂蛋白电泳也是人们熟悉的方法，脂蛋白电泳 技术是利用抗原、抗体反应将电泳分离的脂蛋白予 以鉴别。血清经琼脂糖凝胶电泳，再经染色后可出现 不同脂蛋白的区带。将区带扫描后，可获得区带的面 积及其百分含量^[15~^18]。

6结语

目前，由于种种原因，大多数临床实验室采用电 泳技术仍以传统的电泳方法为基础，没有自动化，使 结果不能及时报告，也使得许多新的检验项目不能 开展并应用于临床常规检査，影响了相关疾病的诊 治和检验医学的发展。随着科学技术的飞速发展，各 种电泳技术和自动化电泳分析仪器的不断发展和更 新，电泳技术在检验医学的教学、科研及临床工作中 将发挥越来越重要的作用。

肝纤维化的血清学诊断进展

肝纤维化（LF)是各种慢性肝病进展中由于肝         积，常伴有炎症并可发展为肝硬化。以往主要依赖肝

内纤维生成与降解失衡，致使过多的胶原在肝内沉       活检病理检査来诊断肝纤维化并确定其程度。但是

进行肝活检不易为患者所接受，而且存在着取材误 差，难以进行重复性比较，故近年来认为肝纤维化判 断的最佳途径是血清学指标。血清学指标大致包括： 细胞外基质形成或演变相关酶、基质分子、基质成分 裂解物，相关的细胞因子及基质降解酶等5类，达几 十种指标，但到目前为止尚无一个指标可体现肝纤 维化的全貌^[1]。现将有关文献综述如下。

1常用的肝纤维化血清学指标

1.1    血清透明质酸（HA) HA是唯一无核心的糖 胺多糖，是结缔组织基质的主要成分。肝纤维化增生 时合成增加，而肝功能障碍时又使其降解减少，故血 浆浓度升高。目前认为,HA既是反映肝纤维化的敏 感指标，也能反映肝功能损害的严重性。Oberti等W 报吿HA诊断LF (分期>S2)的正常值为60pg/L, 其诊断的灵敏度为97%,特异度为73%。谢仕斌 等^[3]检测253例慢性肝病患者血清HA，显示其截 断值为90^g/L,灵敏度和特异度分别为80. 4%和 70. 2%,表明HA作为诊断及排除肝硬化的指标均 有很好的临床应用价值。蔡卫民等^[4]研究肝纤维化 血清学指标，显示HA与肝纤维化程度的符合率最 高，明显优于W型胶原(CW )、B型前胶原（Pcm))和 层粘连蛋白（LN)。罗瑞虹等W通过5项血清学指标 估计肝纤维化程度作Bates逐步差别分析，也得出 类似的结果，认为以单项血清学指标协助诊断肝硬 化应首选HA,在估计肝纤维化程度时，亦以检测 HA为佳。杨伟等^认为，应用血清HA等诊断和分 析肝纤维化和肝硬化时，首先要注意除外肝脏炎症 活动和肝细胞坏死对数据的影响，HA>100ng/ml 时提示肝纤维化的发生和发展，>250ng/ml时则提 示肝硬化的形成。

1.2    I型前肢原（PCI) PC B是IV型前胶原经段 肽酶裂解下来的氨基肽端部分。目前认为，血清PC I增高提示活动性肝纤维化，对LF程度的判定主 要在于动态观察PCI水平，持续升高往往是慢性肝 炎的恶化及LF的发展，下降则表明病情缓解及治 疗有效^[7]。有人报道^M，在CCL4诱导大鼠LF过程 中，肝内I型前胶原mRNA明显下降，但PCI仍处 于高水平，这除反映仍存在活动性LF外，部分原因 可能与肝脏摄取和排泄能力降低有关。郑敏等™观 察到，随炎症坏死加重，PCI值逐渐升高，随LF加 重，PCI[持续升高，但是G₂期和Si期PCI与Q与 S。相比均无明显差异，提示PC I作为早期诊断的 指标不够敏感。也有人观察到，PCI诊断肝硬化的 灵敏度、特异度及阳性预测值均较差„故作为诊断指

Anthology of Medicine,December 2003»V〇1- 22>No- 6

标意义不大。但pc i诊断肝硬化的阴性预测值为 91. 3%〜93. 2% ,故作为排除肝硬化的指标有一定 的临床应用价值^[3]。但需要指出的是，在年幼儿童， 由于生长发育而导致全身间质胶原的更新也可使其 血清PC I水平明显增高，故血清PCI检测对儿童 LF没有判断价值。此外，近年来也有报告I型胶原 的前胶原氨端肽原（P I NP)不仅能反映肝纤维化的 程度，也可反映肝脏炎症程度及病理组织学分度。在 早期诊断LF有独特优势。

1.3    W型肢原（W-C) W型胶原主要分布在血管、 胆管的基底膜中，肝窦内无明显沉积，肝纤维化时， W-C可能是最早增生的纤维，它与LN等共同沉积 在Disse间隙导致肝窦毛细血管化^[1°^]。研究表明，慢 性肝病患者血清W-C主三螺旋区、7S胶原以及PW CP的增高程度，与组织学上的LF程度相关。血清 7S胶原用于判断肝硬化的敏感性为79% ,特异性为 82%，被认为是反映活动性LF的最佳指标^[7]。赵久 法等^[11]探讨了各型肝病患者血清W-C水平，认为 W -C血清水平检测可作为早期诊断LF的良好手段 之一，亦可作为筛选有效抗LF药物的考核指标，其 血清浓度及预后判断有重要的临床意义。

1.4    转化生长因子^(TGFPO 转化生长因子P (TGF-P)是一组重要的生长因子家族，其中TGF-ft 具有调节细胞生长和分化作用，是组织修复过程中 重要因子。文献报道^[12]，慢性肝病患者肝组织中 TGF-P含量是为正常对照200倍，随着LF程度的 加重，其在肝组织中的表达逐渐增强，血清水平升 高。李惠珍^[13]发现慢性乙肝、肝硬化患者TGF-&水 平升高，其升高值与肝炎的严重程度一致，故动态检 测TGF-&可反映LF的病情。虽然FGF-ft血清水 平是诊断早期肝纤维化的敏感指标，对估计馒性肝 炎患者是“无肝纤维化”、“处于肝纤维化阶段”或“肝 硬化”较为准确。但由于血小板数量、肝组织炎症程 度、血清和血浆中含量的不同等因素亦影响了其临 床应用的价值。

1.5    层粘连蛋白（LN) LN是细胞外间质中一种 非胶原性结构糖蛋白，主要来源于星状细胞。在肝纤 维化、肝硬化发展中，LN合成增加并沉积于Disse 间隙中，与IV型胶原结合形成连续的基底膜，即“血 窦毛细血管化”,影响组织与血液间营养和代谢物质 的转换，导致肝细胞功能障碍,并可能是门静脉高压 形成的主要物质基础之一。研究显示，肝硬化患者肝 功能愈差，其血清值愈高，故此指标可反映肝窦毛细 血管化和汇管区纤维化。目前发现该指标的特异度、

敏感度及似然比（LR)低于HA，诊断LF的价值有 限，对鉴定LF与肝硬化也不够理想，故一般不单项 检测，多在联合检测时应用。

2其它的肝纤维化血清学指标 2.1 金属蛋白酶（MMPs)目前已探明该酶有13 种，命名是从MMPs-1到MMPs-13,又分为间质胶 原酶、W型胶原酶及基质溶解素三大类。研究提示， MMPs与组织修复、纤维化及癌浸润和转移等有密 切关系。MMPs-1即组织胶原酶，可使间质胶原酶纤 维在距按基末端3/4处断裂成两段，在胶原和解中 起重要作用，其血清水平可估计肝内纤维降解情况， 慢性肝病患者血清MMPs-1活性随肝病进展逐渐 降低，与肝组织肝纤维化程度呈负相关^[7]» Klaus 等^[u]报告，慢性丙肝患者向肝硬化发展时，循环中 MMPs-2是增高的，而慢活肝者血清MMPs-2与正 常人无差异，并且血浆中MMPs-2酶原浓度在肝硬 化时明显增加，ROC分析提示诊断敏感性好（74% 〜83%)，特异性髙（96%〜100%)，在诊断肝硬化方 面不仅高于经典临床肝功能测试，而且高于血浆金 属蛋白酶组织抑制剂（TIMP-1)和血清HA，因此 MMPs-2增高表明慢活肝病人已经向肝硬化发展。 丫〇₅11丨1^11等^[15]发现肝硬化病人血清中MMPs- 2 浓度明显上升，其肝脏中MMPs-2含量亦明显上 升。谢彦华等^[16]研究表明，MMPs-2、MMPs-9免疫 组化阳性表达面积，肝纤维化组明显高于对照组，并 随造模时间延长而进行性增加，说明MMPs-2、 MMPs-9与LF关系密切，可能起促进作用。也有人 认为^[17]，血清中MMPs-2水平与肝脏炎症活性无 关，与门静脉坏死及LF的程度有关。由此可见，当 血中MMPs-2水平升高，则提示慢性肝炎已经向 LF发展，可以作为临床诊断和治疗提供依据。此外， 在肝纤维化过程中，由于TIMP相对增多，封闭了 胶原酶的活性，从而加强了胶原的沉积，肝内TIMP 表达增加可促进胶原的沉积及纤维化，在慢性肝病 纤维化患者，血中TIMP水平升高，与血清PC K、 W-C、LN呈正相关。

2. 2 肿瘤坏死因子a(TNF-c〇 是一类由单核-巨 噬细胞产生的内源性细胞因子。TNF-<x可促进肝内 Ito细胞及纤维母细胞增殖，并促使其向肌纤维母细 胞和纤维母细胞的转化。同时对纤维母细胞及I_t0 细胞的胶原也有促进作用。李惠珍等^[18]的研究也证 实慢性乙肝中、重度及肝硬化患者血清TNF-a水平 髙于正常对照组，但与LF程度相关性不如TGF- 氏。同时还发现在LF早期Si期患者血清中TNF-a

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水平与S。比较即出现显著性差异，说明TNF 在 肝炎症反应和纤维化启动起重要作用。

2.3其它除了上述血清学指标外，还有诸如纤维 连接素（FN)、粗纤维调节素（UN)、脯氨酰羟化酶 (PH)、脯氨酸肽酶（PLD)、血小板源性生长因子 (PDGF)、7-干扰素（7IFN)及瘦素等在LF的发生及 发展中起着重要作用，然而由于这些指标的临床研 究资料尚缺乏，加之这些指标的灵敏度、特异度均较 低，故还未得到进一步的推广应用。

综上所述，肝纤维化的血清学诊断的研究已取 得了重大进展，一些血清学指标水平的变化与LF 的活动水平及程度、肝脏损伤程度密切相关，对LF 的诊断有重要意义。然而，单一血清学指标对LF程 度的判断作用是有限的，甚至有时不可靠^[19〜^21]»因 此，进一步提高LF血清学诊断的灵敏度和特异度 需要继续寻找新的能反映肝组织纤维化程度的血清 学指标，乃是今后的重要课题。此外，联合检测也可 提高对LF程度的判断及对肝硬化的诊断，是今后 研究的方向。

成都华西华科研究所研发生产无创肝纤维化肝硬化早期检测诊断仪

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