化学发光法检测血清肝纤维化指标评价与无创肝纤维化肝硬化早期检测诊断方法

成都华西华科研究所研究血清肝纤维化指标(透明质酸、层粘连蛋白、iv型胶原、in 型前胶原等广泛应用于肝纤维化的临床诊断、病情监测及 疗效判断肝纤维化指标检测多采用放射免疫法，其标记 物有放射污染且报告时间长。化学发光法，性能稳定、灵敏、 操作简便、报告时间短，显示出较好的应用前景，我们对其应 用于肝纤维化指标检测进行了方法学评价,现报告如下。

1材料与方法

1.1 BL9600化学发光免疫分析仪、y放射计数器分别为天 津贝尔医用电子有限公司、科大创新股份有限公司产品。血 清透明质酸(HA)、层粘连蛋白型前胶原(PC瓜）、IV型 胶原(CR〇,化学发光法测定试剂广东虹业抗体科技有限公司 提供，批号20080701;放射免疫法测定试剂由上海海研所提 供，批号 20080805、20080806。

1.2重复性试验各检测项目分别制备低值、医学决定水

测定，连续20天，计算天间均值甸、标准差⑷、变异系数(CV)。

1.3回收试验用高浓度校准品按1:10的比例加人医学决 定水平浓度混合血清，对照加人等体积的校准品稀释液平行 测试，计算平均回收率。

1.4抗干扰试验吸取EDTA抗凝血红细胞用生理盐水洗 涤三次，用双蒸水溶解红细胞，制备Hbl30g/L溶血液。高值 混合血清加人等体积溶血液制成约含Hb 65g/L溶血标本，对 照加人等体积生理盐水平行测试，计算平均偏差。

1.5比对试验选取40份不同浓度标本（浓度值均在两种 方法的检测线性范围，且尽可能分散丨，用放射免疫法和化学 发光法比对测试。计算回归方程、相关系数、医学决定水平总 误差及配对资料 < 检验。

1.6评价标准重复性试验批内CF<10%、批间CK<15%， 回收试验估计医学决定水平误差、干扰试验平均偏差、比对

平（中值)、髙值三种浓度混合血清，浓度约为HA:45、110、 220ug/L，LN:40、150、300|xg/L，CIV _:45、80、160pg/L，PCni : 65、120、240pg/L。用化学发光法检测三种浓度血清，每浓度 平行五孔测试，上下午各测一次，计算批内和批间均值&、标 准差(_s)、变异系数(CF)。用医学决定水平浓度血清每天随标本

试验医学决定水平总误差小于CLIA’88推荐允许总误差w (HA、LN、PCIB、CIV均为3s)的1/2,均被认为性能良好。

2结果

2.1重复性试验重复性试验结果见表1。

2.2回收试验HA平均回收率95.2%、LN平均回收率

表1化学发光法检测肝纤维化指标批内、批间、天间重复性结果

检测项目及浓	批内		批间		天间
度	x±s	CV	尤±5 .	CV		CV
HA低值	46,35±4.01	8.65	46.12 土 5.23	11.34	46.42±6.51	14.02
HA中值	108.47±7.51	6.92	107.83±10.26	9.51	106.19±11.42	10.75
HA髙值	223.42±12.34	5.52	225.33士 16.79	7.45	226.36±19.52	8.62
LN低值	41.22±3.52	8.54	41.02±3.96	9.65	40.96±5.16	12.60
LN中值	148.68±9.26	6.23	149.81±10.17	6.79	149.63±16.08	10.75
LN高值	302.25±15.82	5.23	304.01 土 19.24	6.33	304.89±27.61	9.06
PCIH低值	66.73±4.53	6.79	65.12±4.98	7.65	66.11 ±6.91	10.45
pc in中值	121.35±7.15	5*.89	122.35±8.44	6.90	122.86± 10.99	8.95
PCBI高值	238.61±10.77	4.51	236.51±13.42	5.67	235.19士 17.65	7.50
CIV低值	46.12士4.19	9.08	45.98±4.82	10.48	45.67±5.94	13.01
CIV中值	78.91 士 6.56	8.31	79.16±7.79	9.84	79.58土 8.39	10.54
CIV高值	162.35±9.86	6.07	163.85±11.22	6.85	164.52土 14.52	8.83

各项目髙、中、低值血清样本批内均小于10%，批间及天间总均小15%。

95.6%、PCI平均回收率 104.8%XIV平均回收率 96.3%，医 1.61|xg/L。

学决定水平误差为HA -5.28fig/L、LN -6.6M<g/L、PC I   2.4比对试验比对试验统计结果见表2。

SWfxg/LXlV -2.96pg/L_Q   3 讨论

2.3抗干扰试验Hb 65 g/L使医学决定水平HA下降 1.53%、LN 上升 2.56%、PCHI上升 1.08%、C1V下降 2.01%，平 均偏差 HA -1.68|jLg/L、LN 3.84|xg/L、PClB 1.30|xg/L、ClV -

化学发光免疫分析口，是以发光物质代替放射性核素或 酶作为标记物，反应体系发光物质在碱性介质中氧化时释放 大量自由能，产生激发态中间体，该激发态中(下转第674页)

第27卷第6期    实验与检验医学       Vol.27No.6

2009 年 12 月           EXPERIMENTAL AND LABORATORY MEDICINE Dec. 2009

曼不动杆菌均来A儿童胸外监护病房且取自呼吸道这与          菌操作并采用非常规消毒液过氧乙酸灭菌效果显著。通过蛋

ICU仍是该菌感染的高危病呼吸道为最主要的感染部位 的冇关报道基本一致有大量文献报道鲍曼不动杆菌有极 高的耐药性，但对于亚安培南还是敏感的，而我院检出的这 批鲍曼不动杆菌对亚安培南显现出高度的耐药性，查阅相关 文献指出可能由于鲍曼不动杆菌的分子量29000的外膜蛋 白丟失而致的对亚胺培南的耐药I'这给于我们临床用药带 来极大的困难，运用常规抗生素或临床医生经验用药均不能 将其杀灭，我们查阅大量文献通过多次试验发现Yoon等^[51提 出的采取用两种和3种药物的联合敏感试验，杀菌效果很 好。主要采用棋盘格稀释的MIC测定，发现多黏菌素B和亚 胺培南及利福平间有协同作用。多黏菌素B、亚胺培南和利 福平三者间也有协同作用，且均苻协同杀菌作用。运用于我 院全耐药鲍曼不动杆菌感染的病患疗效显著。这为临床治疗 危重患者提供了新的可能选择方案。我院检出的这批全耐药 鲍曼不动杆菌均来自胸外监护病房，其病人免疫力低下、抵 抗力差，极易爆发流行，病人最终往往死于无药可医，应引起 我们高度重视。为防止反复交叉感染我们尤其注意对其实行 保护性隔离措施，应胸外手术病人进行侵人性诊疗或监护活 动频繁，所以尽可能减少对病人的损伤，减少或预防感染的 发生。我们对治疗环境进行严密的监测，发现常规消毒方法 不能将其杀灭，培养结果均阳性。我们将病人转换治疗环 境，各类医护用具进行严格的消毒灭菌丁作，尤其是呼吸机、 雾化器等重点设备进行严格消毒灭菌，严格要求医护人员无

白电泳我们观察到两组不同的电泳區带，这提示应该有两种 不同亚型的克隆株，对照标准菌株其生化反映特征极为相 似，但对于精氨酸双水解酶的反映存在差异，对于上述联合 敏感试验并无表现出差异，是杏属于同一菌株不同亚型克隆 有待进一步考证。

间体由振动能级回到基态，释放光子，从而产      生发光现象。化学发光免疫分析敏感度高、特异性强，检测灵

表2化学发光法与放射免疫法肝纤维化指标比对试验统计结果

项0	Y=bX+a	J	tr	Pr	TEc	t	P
HA	Y=1.0678X-10.284	0.9954	242.32	<0.001	-2.826	0.5167	>0.05
LN	Y=0.9941X+7.1883	0.9949	189.54	<0.001	6.3033	0.4795	>0.05
PCI	Y=0.9996X+7.7402	0.9921	126.05	<0.001	7.692	0.891	>0.05
CIV	Y=0.9527X+9.3123	0.9882	75.36	<0.001	5.5283	1.0426	>0.05

回归方程Y=bX+a，Y设定为发光法检测结果、X设定为放射免疫法检测结果；相关系数的;相关性t检验(的；相关性概率(Pi);医学决定水平总误 差(TEC)，配对资料_f检验⑷，配对资料i检验概率(門。两方法检测结果呈直线线性回规、高度正相关，配对资料f检验，尺>〇.〇5,两方法无显著 性差异。

活性高、快速、检测试剂稳定并易于进行质量控制，广泛应用      综上所述，化学发光法检测肝纤维化指标精密度好、准

于内分泌激素、肿瘤标志物、心肌标志物、病毒标志物、治疗      确度高、溶血对检测无干扰，与放射免疫法有良好的可比性

性药物浓度、骨代谢指标和贫血类等方面的检测，是目前免            和一致性，大大缩短了报告时间，且无放射污染。

疫化学应用最为广泛的新技术

成都华西华科研究所研发生产无创肝纤维化肝硬化早期检测诊断仪

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