肝纤维化的实验诊断进展与无创肝纤维化肝硬化早期检测诊断方法

旰纤维化(fib™塒是由多种原因造成的肝脏损伤，首先 启动炎性细胞、kupffer细胞.导致肝星状细胞(hepatic stellate cell,HSC丨激活、增生、转化和分裂.而引起肝内细胞外基® (extmceUular malrbt,ECM>过度沉积，并反映在外周血液中， 是好维生成(filwogeneds)和降解(fibrolysis)动态失衡的结果f ECM由胶原、非胶原性糖蛋白和蛋白多糖(pn>teoglyran,PG>等 坦成。近年来有关旰纤维化血清中某些标志樹的检测应用获 得了突破性进展，本文拟就该问题作一综述C 1透明质酸受体

透明质酸{hyaluronic acid,HA)是一种直链高分子多 糖。其升高幅度与旰硬化程度密切相关，已应用于肝硬化的 常规检洇₃近年研究发现透明质酸受体(CDJ表达的强弱也 可作为肝塞内皮细胞表11发生攻变的标志\

2       胶两蛋白类

胶原蛋白包括EI型前胶原肽(procollageji M peptide. PUP)、IV型胶原(IV type collagen,IV和 VI 型胶原等₃ P up是m型前胶原（pcm丨经氨基壻内切肽酶作用脱下的多 肽.是反映早期旰纤维化程度和活动性的良好指标.能弥补 肝活检不能动态观察肝纤维化过程和取样误差的不足=iv-c 是基底膜的骨架成分，是反映基底膜胶原更新率的指标，特 别是7S胶原被认为是反映活动性旰纤维化的最佳指标₃ w u胶原以原胶原的形式形成纤维丝而存在于组织中，旰纤 维化时显著增加，尤以纤维si周围明M,血清中vr型胶原含纛 明M升髙时,与组织VI型胶原联合检测对评怙纤维生成与降 解有较大帮助6 3脅连接蛋白

骨连接蛋白是一种相对分子量为4.3xia的糖蛋白。它 可调节细胞增殖、移行及ECM重塑。研究表明，正常HSC不 产生骨连接蛋白，肝纤维化时其含量則明显增加，可能是激活 HSC的骨连接蛋白表达明M增加而引起HSC的增殖 4屏粘连蛋白P1片断

层粘连蛋白（丨aminiruLPO又称板层素，是ECM中基底臊 的主要成分，与IV型胶原共同发挥枯附其它大分子成分.调 节细胞生长和分化的功能，曾被认为是旰纤维化诊断的良好 指标_t但近年来关于LNP1片断的血清学检测则被认为是反 映基底联更新率的指标,可反映肝窦的毛细血管化和汇管区 纤维化。

S脯氨酸肽酶

脯氨醭肽酶(prolidase.PLD)全称亚氨基脯氨酸二肽酶 (iminodipeptidaae).是体内广泛存在的一种蛋白水解解，作为 胶原蛋白降解的指标能水解氣基酸羧基末稱含有腾氨酸或 羟脯氮酸的多肽.富含于旰细胞细胞浆中，参与胶原蛋白的 分解代谢,PLD在肝硬化时明显升高。其升高机理可能是在 旰纤维化过程中，PLD活性增强，细胞内胶原降解增强，引起 细胞间胶原合成增加所致.是一项反映旰细瞄损伤和肝纤维 化的主要生化指标。

6内皮素-1

内皮素-1 (endoihelin-l.ET-11是迄今发现的具有最强血 管收缩作用的内源性物质。研究证实.激活的HSC可产生 ET-1,而ET-1可使旰纤维化门静脉压力持续升高上1-1促 进细胞分裂.激活丝裂原激活的蛋白激漪.快速增加细胞内 钙和引起细胞收缩，队而使HSC中DNA合成增加和增殖加 速,井促进HSC转化为肌成纤维细胞A肝脏作为ET的产生 场所和ET的耙器官，对肝脏血流动力学及细胞代谢功雔调 节具有重要作用=

7 decarin

decorin是一种主要存在于结缔组织中与胶原纤维相关 的蛋白多糖，由核心蛋白和一条含疏酸软骨素(CS)/琉酸皮肤 家(DS)糖胺多糖(GAG)倒链组成\其生物活性主要通过其核 心蛋白与相应物质结合而发挥作用，de_C〇rin是小分子间质性 蛋白多糖家族成员，主要由成纤维细胞产生，在肝纤维化的 发生过程中decorin具有i著的抑制胶原纤维合成及负反® 闲控转化■生长因子 pi(iransforming growth fBjctor,TGFpl>活 性=Gressnw等W用结扎胆管和口眼琉乙醇胺(TAA)诱导大鼠 肝纤维化后.发现在胆管结扎后6-8周和TAA处理后8-12 闺，decorin含量高出正常的8-12倍，认为随旰纤维化进展其 含量稳定增加。

8基质金厲蛋白簡及其组织抑制因子

基M 金厲蛋白酶(matrix metalioproteinases，MMPs> 是一 组参与降解ECM的主要水解蛋白酶，目前旰内发现了 8种. 其中MMP-1主要参与I ,11型胶原的降解，与肝纤维化的发 生发展密切相关' 金厲蛋白酶组织抑制因子（tissue in­hibitor of metalloproteinBaes^TIMPs)是多基因家族的编码蛋 白.是一组胶原酶抑制樹，通过与相应的胶原酶结合而抑制 其对胶原的分解=Knittel等I报道，HSC表达胶匣酶、明胶酶 A和MMP-1JMMP-2和TIMP-1;当HSC瀲活后.其上述大多 数MMP表达下闲，而HMP-1表达上调，细胞因子参与:ECM 代谢相关_的调控，总的结果是使ECM降解减少，在肝内沉 积增加^TIMP-1主要特异性地结合激活的MMP-1(间质胶原 酶）从而抑制其对r型胶原的降解，亦即抑制其对ECM

的降解活性_c Northern印迹与反向酶标法表明，原代培养的 HSC激活后能眵合成TIMP-1与TIMP-2,在原发性胆汁性 肝硬化患者肝中的TIMP-1与TIMP-SmRlNA水平是正常肝 内的2~5倍，纤维化肝脏内TIMPs多肽含量是正常的3~7倍 %在肝纤维化过程中TIMPs表达逐渐增强，到肝硬化阶段达 到最高峰I

9纤溶BS凍激活物抑制物

纤溶麻原激活物(plasminogen acdvator.PA)包括组织型 0-PA)和尿激酶塑(u-PA)。前者生要参与纤溶过程，后者主要 作用于生理病理条件下细胞迁移.组织重建等过程，包括 ECM的降解过程，、纤溶酶原激活枋抑制樹（plasminogen acrt'ivatorbhibitoi-U>A[-1)是前两者主要的生理性抑制剂，相 对分子量为5.4X10⁴,是一种单链糖蛋白，属于丝氨酸蛋白薛 抑制剂超家族，其在肝駐中主要由HSC产生研究证实血

发现，CYPIIB2mRNA在HSC中表达上调，进一步明确了 HSC合成醛固酮与肝纤维化之间有密切关系，可能具有促进 肝纤维化的作用¹¹\测定血浆或血清中醛固酮含量，在神除 心血管疾病时预示肝纤维化的意义可能有一定价值。

15粗纤维调节索

粗纤维调节素(ufiduKnJJIV丨可作用于I型胶原a2链的 II切点,以调节成熟胶原纤维的降解.其血清中的含量是反映 肝结缔组织结构改建和降解的指标r

许多细咆因子如肿瘤坏死因子(TNF)、Fas抗睜及其配体 等也与肝纤维化有着紧密的联系，限于篇幅，本文不再赘述^ 总之，肝纤维化的发生是细胞、细睢因子、间质成分多种因素 综合作用的复杂过程，这一过程存在多种调节机制，了解这 些化学成分在肝硬化中的变化，对进一步阐明肝纤维化的发 病机理及为抗肝纤维化治疗提供新的理论依据具有重要意

浆中PAI-1的抗原水平随肝纤维化程度的增加而明显增加， 表明PAI-1与肝纤维化密切相关，通过抑制纤溶酶原及胶原 酶的激活，有效抑制ECM降解,从而导致和(或)促进器官发生 纤维化和硬化^PI]_C 10 细胞间粘附分子-1

细胞间粘附分子-1 (intercellular adhesion molecule-1, ICAM-1丨属免疫球蛋白超家族成员，是一种单链糖蛋白.与肝 坏死的关系密切₃正常肝脏[CAM-1在肝窦内皮细胞、门静 脉内皮细胞、散在的单核炎细胞有微弱的表达.在肝细胞无 阳性表达肌成纤维细胞可诱导[CAM-1的表达，从而引起 白细胞与窦内皮细胞黏附和向病变部位迁移，进而增强纤维 化程度％

神经肽Y(ne_Uwpeptid_e Y,N^TPY丨是人体内最丰富的神经 肽之一，也是一种较强的缩血管物质，并能增强其它缩血管 物质的作用=研究证实肝硬化时血浆中的NPY水平显著升 高，是由于肝功能损害使肝®对其灭活代谢功能下降所致， 而且发现NPY水平高低与病情轻重相一致，认为可作为了 解病情的指标，同时掲示了肝硬化伴腹水患者血浆NPV水 平明显高于无腹水患者.其原因可能是由于肝腹水形成.使 机体内有效血容量减少，反射性地引起机体产生或释放NPY 增多所致^|]3)。其是否与肝纤维化的形成有关及在肝硬化中的 作用机制有持进一步研究。

12纤维蛋白黡结合唾液醵

纤维蛋白原结合唾液酸rtibrincigen bound sialic acid, fsa丨是纤维蛋白原多肽链男;基末端糖链上最边缘的成分. FSA水平影响纤维蛋白原的凝血功能^ Francis等研究发 现_^:肝硬化患者FSA含量明显高于正常人,FSA升高导致纤 维蛋白单体聚合_碍，凝血时间延长，其机理是纤维蛋白上 的唾液酸残基是Ca²⁺亲合部位,Ca²⁺在生理浓度时不能充分中 和高唾液酸化的纤维蛋白分子上多余负电荷，而引起纤维蛋 白聚合延迟其升高可能与HSC被激活后的髙表达有关。 13臚霣酰羟化鷗

脯氟酰羟化酶(prolyl hydroxylase,PH)是胶原合成的关键 酶，可加速脯氨酸羟化，增加HSC胶原的合成，并加速HSC的 活化¹¹^在纤维化的肝组织中其活栓及其含量均明显升高， 可作为肝纤维化指标。

14 S固酮合成_

醛固S是胶原合成和有丝分裂的强剌激剂之一，新近研 究表明，HSC能表达醛固酮合成酶基因一■CYPHB]XYP[[B2 作为P450aldo•可编码醛固酮合成后期阶段的关键酶，

成都华西华科研究所研发生产无创肝纤维化肝硬化早期检测诊断仪

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