肝纤维化相关细胞因子的血清学检测对慢性乙型肝炎肝

纤维化进程的诊断价值与无创肝纤维化肝硬化早期检测诊断方法

摘要目的:检测慢性乙型肝炎患者血清中相关细胞因子的水平，为慢性乙型肝炎肝纤维化的分期提供诊断依据。方法：选择175 例在我院接受治疗的慢性乙型肝炎患者作为研究对象，采用ELISA方法检测患者血清中基质金属蛋白酶抑制剂(TIMP-1， TIMP-2)、脂连素及其受体(AdipoQ)、瘦素(Leptin)、生长因子(PDGF)、骨桥蛋白(OPN) 6项指标的含量，并利用ROC曲线对各指标 与肝纤维化分期之间的关系进行相关性分析。结果:丁1]^-1、1'_-2、1^^₁1在不同纤维化组中呈差异性表达，且八1；110<：高于其 他指标(P<0.05);其余指标无统计学意义(P>0.05)。结论:1'1\0>-1、1'1咖-2工印《11这3项指标对慢性乙型肝炎肝纤维化分期具有一 定的辅助诊断价值，与其他指标相结合可获得更好的诊断效能。

关键词:血清学指标;慢性乙型肝炎;肝纤维化;诊断价值

刖目

乙型肝炎病毒感染易呈慢性化过程，相当一部分病人经反 复肝脏炎症后发展至肝纤维化，各种致病因子所致肝内结缔组 织异常增生，肝组织内细胞外基质过度增生与异常沉积所致肝 脏结构和肝功能异常改变^[1_\在肝纤维化进程中，肝脏星形细 胞的激活、增殖及细胞外基质的沉积是重要环节。许多细胞因 子，如转化生长因子-p(TGF-(3)、血小板衍生生长因子(PDGF) 等相关细胞因子及其受体能够强烈的刺激肝星形细胞的增殖、 迁移，促使其胶原的产生和沉积,在肝纤维化发生发展中起着 非常重要的作用。因此，检测血清中各种细胞因子及细胞外基 质成分浓度是判断肝纤维化程度的理想指标，为肝纤维化的诊 断、逆转及治疗提供依据〜。本研究对慢性乙型肝炎患者血清 中的肝纤维化相关细胞因子进行检测，分析各项指标在肝纤维 化进程中的作用，为肝纤维化分期的临床诊断提供参考。

1材料和方法 1.1研究对象

收集2008年5月到2012年10月175例乙肝病例，所有 病例均进行肝组织活检确定GS分级分期，其中男117例，女 58例，平均年龄34± 12岁。样本取患者清晨空腹状态采集静脉 不抗凝血，分离血清，置于-70°C冰箱保存，集中专人同批检测。 1.2检测方法

采用ELISA方法检测血清脂联素（AdipoQ)、骨桥蛋白 (OPN)、瘦素(Leptin)、血小板衍生生长因子(PEDF)、金属蛋白酶 组织抑制因子-1 (TIMP-1)、金属蛋白酶组织抑制因子-2 (TIMP-2)六项指标。ELISA试剂盒购自美国R&D Systems公 司，严格按照说明书操作。

1.3统计学处理

采用SPSS12.0软件进行统计学分析，根据肝组织活检结 果将所有病例分为2组，轻度纤维化组(SS 2)104例，显著纤维 化组(S>2)71例，数据以(i± s)表示，各组数据先进行正态性检 验及方差检验，分布用t检验或Wilcoxon秩和检验，检验水准 取a=0.05,绘制ROC曲线评价各指标在肝纤维化诊断中的价 值。

2结果

2.1各项指标在不同肝纤维化分期中的变化

轻度纤维化组与显著纤维化组比较，瘦素，TMP-1和 TIMP-2两组均数比较具有统计学差异(P<0.05)，其余各项组间 比较无统计学意义(P>〇.〇5)。见表1。

2.2各项指标在乙肝肝纤维化分期中的变化

ROC曲线下各指标的面积AUROC显示，各指标对肝纤 维化诊断价值均不显著（AUROC<0.75);但Leptin,TlMP-l和 TIMP-2 诊断价值相对较高(AUROC=0.589, 0.642, 0.647) ;PDGF 对肝纤维化分期无诊断价值(AUROC=0.5)。(见图1、表2)。

图1各项指标诊断价值的ROC曲线图 Fig. 1 ROC curve of the markers for diagnosis

表1不同纤维化分期患者血清中各指标的含置 Table 1 Changes of the markers in serum of patients with different fibrosis stages

Indicators	Mild(S< 2)	Significant(S>2)
Cases	104	71
TIMP-l(ng/mL)	1.13± 0.07	1.47± 0.09
TIMP-2(ng/mL)	2.45± 0.06	2.79± 0.09
AdipoQ(ng/mL)	121.1± 6.7	137.8± 8.5
Leptin(pg/mL)	124.9± 14.1	163.1± 19.5
PDGF(pg/mLl)	138.8± 6.3	143.3± 9.0
OPN(ng/mL)	1.09± 0.87	1.45± 0.15

表2各指标对肝纤维化诊断价值的ROC曲线分析 Table 2 ROC analysis of the markers on the diagnosis of liver fibrosis

95% Cl

Item	AUROC	SD -	Min	Max
TIMP-l(ng/mL)	0.647	0.042	0.564	0.730
TIMP-2(ng/mL)	0.642	0.043	0.558	0.726
AdipoQ(ng/mL)	0.569	0.045	0.481	0.658
Leptin(pg/mL)	0.589	0.044	0.501	0.676
PDGF(pg/mL)	0.5	0.045	0.412	0.588
OPN(ng/mL)	0.57	0.046	0.48	0.660

Note: compared between two groups,* P<0.05.

3讨论

肝脏纤维化是许多慢性肝病的共同病理过程，主要是由于 各种致病因子所致肝内结缔组织异常增生，肝内弥漫性细胞外 基质过度沉淀而引起。肝星状细胞(HSC)的激活是纤维化形成 过程中的中心环节，在肝纤维化病程中，一系列细胞因子通过 旁分泌和自分泌方式作用于邻近的HSC，影响其增殖、趋化、代 谢及凋亡™。

脂联素是脂肪组织分泌的含224个氨基酸的活性多肽，它 具有抗糖尿病、抑制肥胖、抗动脉粥样硬化与抗炎症作用^[1°，^1|]。 脂联素通过2型脂联素受体对肝细胞发挥直接作用，并通过 TNF-a发挥抗炎作用，提示脂联素在抗肝纤维化和肝硬化方面 发挥了肝保护作用™。陈万琼等™对慢性乙型肝炎肝纤维化及 肝硬化患者血清脂联素水平以及肝组织中mRNA表达水平进 行了检测，结果显示其在肝纤维化的各个阶段均有表达，且与 纤维化分级呈正相关。我们的实验结果显示，显著纤维化期 (S>2)血清脂联素浓度高于轻度纤维化组(SS 2)，其浓度分别 为(137.8± 8.5)ng/mL 和(121.1± 6.7)ng/mL,但无统计学差异 (AUROC=0.569)。

OPN是一种带负电的非胶原性骨基质糖蛋白，由多种组 织细胞合成与分泌。PatourauxS等M研究血清中的骨桥蛋白水 平与酒精性肝病患者纤维化的关系，结果显示血清OPN水平 随着肝脏炎症程度增加而轻度增加，而其随着纤维化程度加重 而明显增加，并提出血清OPN升高是显著纤维化(F2 2)评估的 独立危险因素。我们的数据主要针对慢性乙肝患者纤维化，结 果表明显著纤维化患者(S>2)血清浓度升高，但无统计学意义 (AUROC=0.57)，这与既往研究结果存在一定差异，主要原因在 于研究对象的差异，该项目在酒精性肝病导致的纤维化诊断中 有很好的应用价值，但对病毒性肝炎肝纤维化的诊断价值仍需 要进一步证实。

PDGF能强烈刺激HSC的增殖和迁移，促使其胶原的产生 和沉积,在肝纤维化的发生和发展中作用非常重要^[〜⁶¹。另外， PDGF是一种重要的促分裂剂，与多种细胞因子，如TGF-p和 ECM等相互作用可促进肝纤维化的发生和发展。有研究表明， PDGF与肝纤维化指标HA、LN、PIIINP和IV.C含量呈正相关 ^[17>。但在我们的实验中并未体现其相关性，这可能与检测试剂 的特异性和操作规范等因素有关。我们仍需进行更加标准化方 法及丰富的组织学证据来完善此项研究，以获得更为确切的纤 维化检测指标。

瘦素是近年来发现的调节机体内分泌和能量代谢的重要 的脂肪源性肽类激素，具有细胞因子的特性™。正常肝组织不 表达瘦素，但在病理性因素刺激下，可发生肝纤维化，且随纤维 化程度加重，瘦素、瘦素受体表达增加，研究显示血清瘦素水平 与肝纤维化血清学指标呈正相关^[1\提示血清瘦素水平可在一 定程度上反映肝纤维化的程度。这与我们的研究结果基本一 致，但如果要取得具有临床价值的诊断意义，该项目需要和其 他纤维化指标进行组合，以进一步提高其诊断效能。

TIMP主要由HSC、肝细胞等产生,可在原位抑制MMP活 性，使ECM降解减少，有利于肝纤维化的形成。TIMP水平随 肝病进展而逐渐升高，其水平可反映肝组织病变程度™。在前 期研究中，我们发现TIMP-1和TIMP-2与肝纤维化分期具有 很好的相关性，并与其他各项结合制成诊断模型，准确率可达 T7.9%。在研究中，TIMP-1和TIMP-2同样表现出较高的诊断价 值(AUROC=0.674,0.672)，明显高于其余项目。

综上所述，我们认为金属蛋白酶组织抑制因子具有一定的 诊断肝纤维化的价值，瘦素也与肝纤维化具有相关性。TIMP-1、 TIMP-2和瘦素与其他指标组合可取得不错的诊断价值，而 PDGF、骨桥蛋白和脂联素在肝纤维化诊断中的意义有待商榷。

成都华西华科研究所研发生产无创肝纤维化肝硬化早期检测诊断仪

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