肝纤维化的机理及诊断与无创肝纤维化肝硬化早期检测诊断方法

成都华西华科研究所研究肝纤维化是肝内结缔组织的异常增生，是各种 慢性肝病向肝便化发展的必经阶段，肝纤维化的机 理和诊断研究对肝硬化的防治有重要意义。近年来， a苷生物化学及分子生物学研究的进雇，人们对引 起肝纤维化的各型胶原及基质蛋白的产生和作用有 了更进一步的认识，建立了一系列血濟学诊断方法， 如血清1 a, n a胶原蛋白、纤维连结蛋白和层枯蛋 白、遘萌质酸和羟晡氨酸的检测等，为早期诊断纤维 化及观察肝纤维化的进程与治疗效果的判断提供了 可能.

肝纤维化的发生机理-%细胞成分

近年来研究表明，肝纤维化的细胞来s主要是. 贮脂细胞（即It_〇细胞）及巨噬细胞，各种致病因子 所致的*性肝细B炎症刺激单核巨噬细胞系统释放 各神细胞因子，通过细胞因子怍用促使]w细胞转 化为成纤维细醣并产生过*的皎原及基质，沉积于 〇18«眩醺，导致肝窦毛细血管化，*终导致整个肝 小叶的纤维化.门脉区成纤维细胞、病变肝细B亦与 肝纤维化的形成有关^w.进一步硏究发现馒性活动 性肝炎碎屑坏死灶中有大*毛细管样胆小管增生且 其周围有较明显的纤维化_t同时胆小管胞浆中vfl R原强性，故认为咀小管细胞亦是肝纤维化的主 要细胞来逋之一.一般认为：在正常情况下lt〇细S 和非实质细胞(如巨噬细胞)是产生胶原的主要细胞 来S,在病理状态下，肝细胞也参与肝钎维化的形 成。         '

二、晈原

目前发现有13种不同分子型的胶原分子.肝驻 中主要有I , I、w, "V、VI型胶原。每一条撤纤磕 都可以是多种胶原分子聚合而成.例如I塑与1型 胶應常混合存在1而v a胶原常存在于其核心处，因 而有学者认为很可能V型皎原与肝纤维化的始发机 制有关•胶原蛋白的合成可分为细胞内和细B外两 个阶段„

1■细胞内阶段，U)细S核内前胶原基因转录 成前胶SmRNA,并游离至细咆核外.（2)在细胞 浆中，粗面内质网的核蛋白体将前胶原的mRNA转 译成前■胶原多肽Q呔链）•此过程霱猶S酸羟化曄 及糗氮酸羟化酶催化。（31在内呒网中三条_〇呔链之 间以二琉费相结合，形成螺旋状前胶原。U)前胶原

在髙尔基氏体内帱化后分泌于细胞外。部分前胶原 可在细B内降解。

2.细B外阶段：胞浆中内切肽酶切除前胶應两 端的非蠼旋状肽段，生成原胶原。匣皎原;自行聚合成 胶原歎纤维.此纤维不哆稳定，一部分在细胞外降 »，另一部分在单胺氧化酶（MAO)作用下形成稳 定的胶原纤维.

在胶原纤维形成过程中，受到体内抑《与促进 合成因素的调控，这些调控因子可陡是细醣因子。目 前发现的细胞因子有趋化因子、白细胞移动抑制因 子、巨ft细胞移动抑制因子、促纤维生成因子，单核 巨《细嗆因子，淋巴细胞#等*这些细胞因子起免疫 调节怍用，可促进]to细S转化成为纤维母细S,同 纤维蛋白的合成密切相关。

三、基质

基庚性#蛋白（MG)方面，研究较多的有屋粘 蛋白（LN)、纤维连结蛋白（FN)。有硏究发现，在 肝纤维化形成过涅中，FN最早出现明显增多，并在 胶庞纤维形成前形成完全的FN间薷，在肝纤维化 消退时_T FN消退最快，提示FN与肝纤维化的始发 机制有关.FN对LN和K型胶原的沉积也有一定诱 导作用，可较好地反陕肝纤维化的活动情况' 新近 研究还发现了多神MG,有苗I纤维连结蛋白，副层粘 蛋白、白栓粘合索、细胞粘合索、粗纤维调节索等， 其功鼴是在肝釺维形成过程中共同起趋化1粘附作 用井促进皎原的分®。

肝纤维化的诊断

肝纤维化的确诊有糗于肝活组织检査，因肝活 检为一创伤性检査，多数患者难以接受t且肝活检本 身具有一定局限性.给肝纤维化的早期诊断带来困 难.目前肝纤维化的诊断研究集中在如何建立一套 阃便可行/既敏感又特异的血淸学诊断方法。

参与胶原代榭有关酶的检测

羟化SK转移氧化薷参与胶原的合成代榭. 胶原酹及肽_参与分解代谢。但这些酶的敏感性特 异性不髙，临床应用较少„其中对MAO的研究较 多。MAO与胶原微歼维的稳定性密切相关.有研究 发现MAO的活性与肝组织学S示的肝内纤维化程 变相一致〜.如纤维化仅限于汇管区或中央靜脒区. MAO大致正常；如纤维化向肝实质内侵入，约半数 病例MAO升髙；当柑邻汇管区之间或汇管K与中

 央静眛之间有纤维架桥时，80%病例MAO升髙；当 假小叶形成时,.MAO全部升高.但由于线粒体中含 有MAO、故其它原因引起的肝损害时，血清MAO 亦升高.

二，胶原和胶质代埘产物的检测

1.      羟晡氨酸（HYP) _t胶原蛋白中HYP含量在 10%以上.有别于其它蛋白赓.检测血淸HYP含量 可反映皎原蛋白代谢的活跃程度.慢性活动性肝炎 和肝硬化时血淸HYP均升高，尤以慢活肝为甚，故 HYP可反映肝纤维化的进程，临床较为常用.

2.      【型胶原（C I ),肝硬化早期以I逭胶原合 成为主，晚期以C【合成为主.肝脏广泛纤维化时C

[明显增加，而纤维化早期C【升高不明显，故C I 对早期肝纤维化的诊断意义不大.

3. 血清I型前胶原肽P1P反映肝K 里型胶原的合成与分解.在肝埂化早期，P I P即升 高t 一且P1P下降，則肝埂化进入晚期，此时■型 胶原合成滅少t而以C I合成为主，故P I P被认为 是早期纤维化的良好指标.但有人认为PIP与 炎症反应密切相关，肝细胞炎症损伤时P1P升高 是因为* S皎原分解增加而不是合成增加.P I P与 肝纤维化的程度相关性较小，甚至无相关有入 报道血清里型前胶原（PC1 )与PIP有相同的临床 意义^B],但由于PCI的分子量较Pi p大十几倍，较 P里P為检》,且急性肝炎时肝细胞炎症坏死可能对 PCI彩响较小，因此PC ■鼸糾正P1P因肝细胞炎 症而导致的误差，在判断肝纤维化上优于PIP.

4.      1VS皎原与N■型胶原的7a片段（7,胶原）， W型胶原是基底瞋的重要成份，血清W型胶原浓度 与肝钎维化程度相关•国内有人报迸用日本生产的 试剂盒测肝病患者血清va皎原，发现急性肝炎，慢 性肝炎、肝硬化三组差异有显著性，慢性迁延性肝 炎，慢性活动性肝炎.肝硬化三组相比，结果依次升 高^[' ⁷，胶原亦能反映肝内n型p原的合成，据报 道肝纤维化时13U n'型前原原mRNA及7_S胶原 均升高，而PIP稍后于7s胶M亦升高，提示7a皎 原为比PIP更敏感的诊断肝纤维化的指标，应引 起足够重视.

三、基质有关指标的检》

1.透明质酸（HA), HA是一种氣基多国 外报道肝病患者血ftHA明显升高^[||1]，近年来越来 越奪到入们的认识，现认为血涛HA水平能更好地 反&肝纤维化的程度也有入认为在诊断肝纤

维化时HA更优于PIP和7_a胶原。用放免法测血 清HA,再常入为2〜110g/L,慢性活动性肝炎和肝 埂化分别大于165和256g/L,可用于肝纤维化与肝 埂化的鉴别诊断。        ,

2•纤维连结蛋白（FN):有研究报道急性肝炎、 脂肪肝、慢性肝炎及早期肝*化时FN升高。亦有硏 究表明，肝纤维化早期血及肝组织中FN均升高，随 着肝纤维化的发展，肝中FN升高而血浆FN回降， 故认为血浆FN有可能反映肝纤维化的活动情况， 但不明与肝组织中FN的含*保持一致国外近 年报道用酶标法》定血清F亚单位FN受体 (FNR) , FNR存在于正常肝细胞餌暎上和肝窦上皮 细胞，血淸FNR可随肝纤维化的进程而升高，故 FNR被认为是更好的肝纤维化的标志.

L层粘蛋白（LN): LN是一种糖蛋白，主要存 在于基底W的透明层，与R型皎原等共同维持基底 瞋的结W和功能.LN的研究是目前较为活跃的領 域之一，国内外已违立多种检测血清LN的方法.研 究表明t LN可反映肝纤维化的程度，血清LN含量 随着肝脏病变程度的加重而平行升高，尤其在肝粳 化中升高明显

4. N■乙酰-^DS基葡萄糖苷酶（NAG〕： NAG 是一种溶酶体B,参与结縴组织基质的降解_a据报道 急性肝炎、慢性活动性肝炎、肝硬化患者血濟NAG 显著升高，故斑清NAG总活性可怍为一重要肝纤 维化指标而用于临床.但NAG缺乏恃异性，故有 入认为其同功酶A对反映肝纤维化过程可明较其 总活力为优.

   成都华西华科研究所研发生产无创肝纤维化肝硬化早期检测诊断仪

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